介绍
本方案对骨髓细胞分离进行了说明[1、2]。与全血相比，骨髓产生的细胞更为复杂，包括造血干细胞（负责白细胞，红细胞和血小板的产生）以及基质细胞（如内皮细胞，成纤维细胞，巨噬细胞，成骨细胞，破骨细胞， 和脂肪细胞。
材料
- 细胞培养皿（例如 Thermo Scientific Nunc EasYDish 100 mm 培养皿，货号：150466）
- 实验室擦拭纸（例如 Fisher Scientific Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes 1-PlyFisher 专用擦拭纸，Fisher Scientific 货号：06-666）
- 乙醇（例如 分子生物学级别 100% 无水乙醇，货号：T038181000CS）
- RPMI 完全培养基
- RPMI 1640 培养基（例如 Gibco BenchStable RPMI 1640，货号：A4192301）
- 2 mM 左旋谷氨酰胺（例如 Gibco 200 mM 左旋谷氨酰胺，货号：25030149）
- 胎牛血清（例如 Gibco 胎牛血清，货号：26140087）
- 可选：青霉素-链霉素（例如 Gibco 青霉素-链霉素（5000 U/mL），货号：15070063，或 Gibco 青霉素-链霉素（10000 U/mL），货号：15140122）
- 手术刀和刀片
- 5–10 mL 注射器（例如 Fisherbrand 10 mL 一次性无菌注射器，货号：14-955-459）
- 25 号针头（例如 Fisher Scientific BD 通用针头和 PrecisionGlide 皮下注射针头，货号：14-826-49）
- 70 μm 细胞筛网（例如 Fisherbrand 无菌细胞筛网，货号：22-363-548）
- 50 mL 锥形管（例如 Thermo Scientific Nunc 50 mL 无菌聚丙烯锥形离心管，货号：339652）
- 红细胞（RBC）裂解缓冲液（例如 Invitrogen eBioscience 1X RBC 裂解缓冲液，货号：00-4333-57，或 Invitrogen eBioscience 10X RBC 裂解缓冲液（多物种），货号：00-4300-54）
- 细胞计数仪（例如 Invitrogen Countess 3 自动细胞计数仪，货号：AMQAX2000）
- 磷酸盐缓冲液（PBS）（例如 Gibco PBS (10X)，pH 7.4，货号：70011069）
步骤
细胞分离
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方案提示：
在冲洗股骨后，可以通过研钵和研杵压碎来获得其他细胞。也可以从压碎的骨盆骨和胫骨中分离骨髓。细胞计数
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参考文献
- Madaan A, Verma R, Singh AT et al.(2014) A stepwise procedure for isolation of murine bone marrow and generation of dendritic cells. J Biol Methods 1(1):e1.
- Liu X, Quan N (2015) Immune cell isolation from mouse femur bone marrow. Bio Protoc 5(20):e1631.PMID 27441207.
仅供科研使用，不可用于诊断目的。