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MIGRATED CONTENT FOR REFERENCE BEGINS
成像效果更优的流式细胞仪，可同时进行形态学分析和流式细胞数据分析
- Invitrogen Attune CytPix 成像型流式细胞仪将声波聚焦与高速明场相机相结合，能够同时进行高通量的流式细胞分析和高分辨率的明场成像
- 自动化图像分析功能将事件特征转化成可与标准流式细胞参数结合的不同扩展参数
特点
Attune CytPix 成像型流式细胞仪是一款先进的细胞分析仪，与 Attune NxT 型号具有共同特点。
主要不同的特点在于高速明场相机，能够在单个事件通过流动室时记录其图像。高速相机和 Attune 软件可帮助确保您分析的事件是单细胞、而不是双联体、团块或碎片。这对于细胞和基因治疗研究相关的应用而言至关重要，但也可用于几乎所有流式实验，帮助研究人员了解每个细胞群的形态，以便进行分析。 这些图像还有助于识别碎片并优化实验方案。
工作原理
在 Attune CytPix 流式细胞仪上采集样本时，高速相机可采集并存储多个事件的图像。高灵活性：Attune 流式细胞仪软件可按需调整图像采集频率，并可根据样本流速和图像大小，每秒可采集多达 6,000 张图像数据。声波聚焦有助于定位细胞，从而获得清晰的细胞图像。
声波聚焦使得细胞处于最佳成像位置
没有声波聚焦（左）时，微球没有聚集在中心位置且经常模糊不清。声波聚焦（右）可减少横向位置变化、时间变化和景深限制，从而可获得清晰的图像。
无论流速大小如何，都可以保持稳定的光学聚焦。即使是在最高 1,000 μL/分钟的流速下也对细胞进行成像，并可根据目的细胞类型调整焦距、成像窗和光源设置。
图像分析可提高数据准确度
CytPix 成像型流式细胞仪上的 Attune 流式细胞仪软件可使用接受过白细胞和微珠预先培训的模型分析图像并将图像中的细胞特征解读为定量参数。 这些参数与捕捉的图像和流式数据相结合，使研究人员能够获得对样本的新见解。可以通过调整设门来排除聚合体、偶合事件、碎片和不需要的细胞。
该软件能够以每秒高达1,000幅图像的速率自动进行图像分析，并且可由用户在软件后台运行的进程队列中进行管理。这些基于图像的扩展参数提供了数据，使用户能够通过细胞计数（颗粒计数）和形态学特征，如圆形度 （圆度）、大小 （面积）、形状 （偏心率） 和复杂性 （熵]）来确认单体。 对这些扩展参数设门后，您可以快速、准确地鉴别感兴趣的细胞群，从而在不需要手动审查或仅需少量手动审查的情况下确认设门策略。您可以使用反向设门扫视全分辨率图像组合，可针对散点图上的任何细胞群将您所见与散射光、荧光或基于图像的参数相关联。设门时，借助强大、由数据驱动的细胞分析，可以提高数据质量并让您充满信心。
成像型流式细胞术的应用领域
成像型流式细胞术可用于任何想了解每个细胞群形态信息的研究。成像 功能辅助进行更深入地结果分析，以便：
实时确认圈门的准确性
基于图像结果调整门和相机设置，排除黏连细胞和碎片，以便更准确地设门
进一步对细胞群进行表征化分析
在细胞凋亡检测等现有流式方案中同时记录不同形态的细胞群
捕捉细胞间的相互作用
可视化和区分偶合事件
可视化大量细胞群的图像验证
使用高通量、详细的图像验证
高通量质量控质
细胞培养质控工作流程中加入快速成像结果，可以在高通量处理微孔板的同时监测细胞形态变化，从而快速检测细胞培养的质量问题
优化设门策略。即使是稳健的手动单体设门也容易出错，因此它仍是几乎所有流式细胞分析测定的主观决策点。成像结果可用于确认和调整设门，以便只圈出感兴趣的单个细胞。
在此，一名有经验的用户已自信地为单体设门。在评估手动单体门后，源自 CytPix 图像的参数 ParticleCount 显示此门包含超过 4% 的聚合体。
也许更重要的是，这些事件含有表型明显不同的细胞，这可导致对双阳性事件（特别是在稀有细胞群中）做出错误结论。
表征细胞群。图像中的形态学信息增加了流式细胞数据的丰度。 例如，图例分析了用 Annexin V 和 PI 的凋亡结果，通过成像数据可同时获取各细胞群中的细胞形态特征。如果仅通过流式染色分析无法获取该形态变化的信息。
分析细胞间相互作用。成像数据可以揭示细胞之间的相互作用。 图中，基因编辑过的 CAR -T 免疫治疗细胞与 Ramos （淋巴瘤）细胞共培养后经染色，在 Attune CytPix 成像型流式细胞仪上进行数据采集并成像。第二象限的图像（两种染料均为阳性，只采集单个细胞）显示 CAR-T 细胞对靶向 Ramos 细胞具有明显的杀伤作用，提供了改造后细胞具有功能的确切证据。
我们之前展示了拍摄 CAR-T/Ramos 细胞相互作用图像的能力。现在我们来看看最感兴趣的细胞群—双阳性事件，以了解更多信息。现在我们可以使用源自图像的扩展参数（圆度与强度偏斜度）来进一步检查这些细胞群的特征并改进这些事件的设门，从而提高数据稳健性。在此，通过使用基于图像的定量参数的设门策略，我们可区分相互作用细胞与偶合事件，从而更准确地分析相互作用细胞。
发现更多生物学现象
利用Attune CytPix 成像型流式细胞仪对细胞进行反向设门，基于图像形态可能发现更多感兴趣的细胞亚群，而传统流式数据无法提供这些信息。
例如，大肠杆菌可培养为两种类型的菌落形成单位（CFU）：与单细胞相似的短 CFU，以及带裂变环的不完整延长结构，代表每个近似细胞长度的不完全收缩。传统单个细胞门（SSC-A/SSC-H）和荧光信号门（SSC/核染色）均无法区分这些细胞群。但通过Attune CytPix 成像型流式细胞仪，可以查看和分类图像信息，并根据其形态特征为不同 CFU 类型进行设门。
鉴别两种大肠杆菌 CFU 类型。大肠杆菌在37ºC 条件下培养过夜，然后在 4ºC 条件下继续培养 3 天。使用 Attune CytPix 成像型流式细胞仪在 100 μL/min的流速下采集样本。可以从这些图像鉴别两类 CTU：(A) 代表单细胞的短菌落和 (B) 带不完全裂变环的加长结构。各亚群细菌的典型图像如图所示。对所选图像进行反向设门证实两个细胞群的特征与FSC/SSC散点图的流式结果（橙色点，左）不同。
细胞培养质控。成像数据可在细胞培养流程的早期有效帮助发现和跟踪细胞培养问题。例如，在某实验室中，常规检查Ramos（淋巴瘤）细胞原代培养时发现，虽然可以看到细胞增殖现象，但细胞计数减少、细胞活力降低。进一步检测发现存在大量微生物污染，但这是从何时何处开始的？
由于该细胞系之前已经在Attune CytPix 成像型流式细胞仪上进行了分析，研究人员重新打开图像，发现至少五天前就记录了微生物感染。当时，污染早期的迹象被误认为碎片，但回顾性研究证实培养物中存在具有相同特征的问题细胞。追踪感染有助于建立额外的实验室操作规范，以筛选和保护对实验起关键作用的细胞系。
视频和演示
激光器和检测器配置
| 激光器 | 激光器配置 | 检测通道数 | 总检测通道数* | 货号 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 紫激光，405nm | 蓝激光，488nm | 黄激光，561nm | 红激光，637nm | ||||
| 2 | 蓝/黄 | ✝ | 3 | 4 | ✝ | 9 | A51842 |
| 蓝/红 | ✝ | 4 | ✝ | 3 | 9 | A51840 | |
| 蓝/紫 | 4 | 4 | ✝ | ✝ | 10 | A51841 | |
| 蓝/紫 6 | 6 | 3 | ✝ | ✝ | 11 | A51843 | |
| 3 | 蓝/红/黄 | ✝ | 3 | 4 | 3 | 12 | A51845 |
| 蓝/紫/黄 | 4 | 3 | 4 | ✝ | 13 | A51846 | |
| 蓝/红/紫 | 4 | 4 | ✝ | 3 | 13 | A51844 | |
| 蓝/红/紫 6 | 6 | 3 | ✝ | 3 | 14 | A51847 | |
| 4 | 蓝/红/黄/紫 | 4 | 3 | 4 | 3 | 16 | A51848 |
| 蓝/红/黄/紫 6 | 6 | 2 | 3 | 3 | 16 | A51849 | |
| *检测通道数包括所有荧光通道以及前向角和侧向角散射光通道。 ✝激光器可升级；绿色激光器不适用于 Attune CytPix | |||||||
性能数据
由于增加了高速明场相机，Attune CytPix 成像型流式细胞仪比 Attune NxT 流式细胞仪高 9 cm (3 in)，但其仍然具有较小的占地面积，且与生物安全柜兼容，因此可节省实验台空间。
光学系统：荧光检测 | 激光器功率 | 激光 | 波长 (nm) | 光束整形光学元件 (BSO)* (mW) | 二极管功率** (mW) |
紫色 | 405 | 50 | 100 | ||
蓝色 | 488 | 50 | 100 | ||
黄色 | 561 | 50 | 100 | ||
红色 | 637 | 100 | 140 | ||
* 在激光穿过光束光学元件和整形滤光片后，测得的可用激光功率。 ** 厂商额定的理论最大值。 | |||||
激光器激发 | 最大限度减少激光光线偏离引起的噪音和反射损失，从而优化了激发光 | ||||
激光器 | 10 x 50 μm 平顶光斑激光器，可提供稳定的激发光 | ||||
发射滤光片 | 最多14个荧光通道，配备波长可调的光电倍增管 (PMTs)；用户可自行更换的键控滤光片 | ||||
激光分离 | 100 μm | ||||
光学校准 | 采用预先对齐的焊接光纤固定校准；无需用户维护 | ||||
机载热电冷却器 | 无预热延迟；光纤不受“开/关”影响 | ||||
Simmer 模式 | 即时“开/关”，减少使用和老化，延长10 倍使用寿命；只在采集样本时打开；报告激光器使用小时数 | ||||
流动室中的激光检测区 | 平顶光斑激光器宽度范围内的变异系数 (CV) <3% | ||||
可升级 | 方便现场更换 | ||||
光学系统：成像 | 激光器激发 | 405 nm | |||
脉冲宽度 | < 50 纳秒 | ||||
液流系统 | 流动室 | 石英杯凝胶耦合1.2 数值孔径 (NA) 集光镜，200 x 200 μm | |||
样本分析体积 | 20 μL–4 mL | ||||
自定义进样速度 | 12.5–1,000 μL/分钟 | ||||
进样 | 采用正向位移注射泵进样，可精确测量进样体积 | ||||
样本管 | 可兼容 17 x 100 mm 至 8.5 x 45 mm 的试管 | ||||
液位感应 | 主动式 | ||||
标准溶液桶 | 1.8 L 鞘液桶，1.8 L 废液桶，175 mL 关机液桶，175 mL 清洗液桶 | ||||
液体储存 | 所有液体均储存在仪器内部 | ||||
外置液流系统选项 | 可选配 10 L 鞘液桶 | ||||
额定液体消耗量 | 1.8 升/天 | ||||
自动维护程序 | ≤15 分钟开机和关机——深度清洗、消毒和排气泡模式 | ||||
性能：荧光检测 | 荧光灵敏度 | FITC≤80 MESF，PE≤ 30 MESF，APC≤70 MESF | |||
荧光分辨率 | 碘化丙啶染色的鸡红细胞核 (CEN) 单峰的变异系数 CV <3% | ||||
数据采集速度 | 最快 35,000 个事件/秒，34 项参数，基于每项泊松分布统计的重合率为 10% | ||||
最大电子速率 | 所有参数均可达 65,000 个事件/秒 | ||||
样本残留 | 单管形式：<1% | ||||
前向角和侧向角散射光灵敏度 | 能够区分噪声和血小板 | ||||
前向角和侧向角散射光分辨率 | 经优化可区分出裂解全血中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞 | ||||
前向角散射光 | 配备 488/10 nm 带通滤光片的光电二极管检测器 | ||||
侧向角散射光 | 默认配备 488/10 nm 带通滤光片的光电倍增管；可选配 405/10+OD2 nm 带通滤光片 | ||||
荧光检测器 | 14 个独立检测器 | ||||
电子脉冲 | 所有探测器均可测量脉冲信号的面积、高度和宽度 | ||||
紫激光侧向角散射光分辨率 | 可选配紫激光侧向角散射光滤光片，以更好地区分噪声和微粒 | ||||
最小检测颗粒 | 侧向角散射光可检测 0.2 μm，采用 Bangs Laboratories 的亚微米微球校准试剂盒——下述条件下侧向角散射光可检测0.1 μm：使用标准0.5 mm模块配置的Attune NxT 流式细胞仪、Invitrogen Attune NxT 488/10 滤光片（货号 100083194）以及经过0.025 μm 过滤的 Attune 鞘液（货号 4488621、4449791 或 A24904） | ||||
性能：成像 | 像素分辨率 | 0.3 微米 / 像素 | |||
物镜放大倍率 | 20倍 | ||||
物镜数值孔径 (NA) | 0.45 | ||||
理论分辨率 | 0.6微米 | ||||
检测下限 | 以可视化方式检测 800 纳米颗粒 | ||||
图像采集速率 | 最多每秒 6,000 幅图像，具体取决于图像大小和样本浓度 | ||||
图像尺寸 | 96 x 96 像素 - 248 x 248 像素 | ||||
视野 | 29 x 29 μm–74 x 74 µm | ||||
软件 | 补偿 | 完整矩阵—自动和手动模式，可在流式图上进行精细调节；可使用试管和微孔板上样 | |||
流速 | 通过软件精确控制流速；无需进行硬件调节 | ||||
实时数据监测 | 在样本采集过程中，实时更新统计数据，最高可达到 35,000 个事件/秒 | ||||
图形叠加 | 样本之间可进行比较分析；3D 视图 | ||||
样本回收 | 系统可回收未用过的样本 | ||||
浓度 | 无需使用绝对计数微球，可直接检测样本浓度 | ||||
软件布局 | 为各个用户账户提供完全自定义的操作界面 | ||||
气泡检测技术 | 停止自动运行以保护样品完整性 | ||||
单个文件最大事件数 | 2000 万，可追加 | ||||
热图 | 按照微孔板布局定义设置；筛选视图用于试管或微孔板分析 | ||||
阈值 | 最多可设置4个阈值，用户可根据需要设置布尔逻辑 | ||||
设门 | 分级设门，可设衍生门 | ||||
电压 | 自定义调节 | ||||
视窗拓展 | 自定义调节 | ||||
面积调节因子(ASF) | 自定义调节 | ||||
采集设置 | 文件可保存为 FCS 格式，并在导入后复原 | ||||
实验模板 | 从现有实验创建——可导入之前优化和设定的仪器设置、软件界面、实验方案、热图设置和补偿条件 | ||||
试管—微孔板转换 | 一键操作实现试管与微孔板间的转换；管板转换时，无需卸载、无需额外质控、无需重启仪器 | ||||
图形分辨率 | 出版级数据图；支持 TIF、PNG、BMP、JPG、GIF 和 EMF；可快速复制和粘贴图片到任意外部应用程序中（例如 Microsoft™ PowerPoint™ 软件） | ||||
用户账号管理 | 管理员可创建具有指定身份、高级设置权限、单独的账户管理功能、用户时间跟踪和样品计数功能的个人账户 | ||||
成像软件 | 图像采集设置 | 可设置记录图像总数、图像频率、图像采集门、图像大小和位置、对焦和照明，以控制实验设计和数据占用空间 | |||
图像视图 | 图像分析时可浏览整个图像库，另外细胞图像选项可查看工作区上任意细胞群的单幅图像 | ||||
图像反向设门 | 通过在相应的流式图上为全部或选定图像进行反向设门，以实现图像结果与流式数据的关联 | ||||
图像测量工具 | 用于测量图像中事件面积的椭圆工具，单位 µm2 | ||||
图像导出选项 | 将图像导出为 8 位 TIF、PNG、GIF、BMP、JPG 或 EMF 格式 | ||||
图像分析 | 图像分析模型 | 白细胞；微珠 | |||
参数/特征 | 以下5个类别中 >25 个已测量的图像参数：形状特征、强度特征、对象特征、像素特征和系统特征 | ||||
模型的样本尺寸范围 | 5-20 μm | ||||
图像处理速度 | 快捷：1,000幅图像/秒 | ||||
像素 | 16位图像 (248 x 248) | ||||
文件类型 | 扩展的 FCS | ||||
文件类型 | 形状特征误差 <10% | ||||
质量和监管 | 仪器追踪 | 利用 Levey-Jennings 谱图法自动进行日常基线和性能测试 | |||
保修期 | 1 年 | ||||
生产验证测试 | 每台仪器针对组件完整性和参数性能均进行过测试和验证 | ||||
质量管理体系 | 流式细胞仪生产标准符合 ISO 13485:2003 | ||||
可靠的安装规范 | 仪器由工程师安装；预售清单、发货、安装和性能验证均遵循标准化流程 | ||||
监管状态 | 仅供研究使用 | ||||
计算机 | 软件要求 | Invitrogen Attune 流式细胞仪软件 | |||
显示器 | 27 英寸平板显示器（1,920 x 1,080 分辨率）；支持双显示器 | ||||
计算机 | 台式电脑 | ||||
操作系统 | Microsoft™ Windows™ 10 64 位 | ||||
FCS 文件格式 | FCS 3.1、3.0 | ||||
处理器 | Intel™ Core™ i7 处理器 | ||||
RAM | 64 GB | ||||
硬盘 | 2 x 8 TB SSD，560 MB/秒；集成 RAID1 控制器 | ||||
GPU | NVIDIA Quadro P2200 | ||||
安装要求 | 电源要求 | 100–240伏，50/60赫兹，<150瓦 | |||
散热器 | <150瓦 | ||||
工作温度范围 | 15–30°C (59–86°F) | ||||
工作湿度 | 10-80%，无冷凝 | ||||
声频噪声 | 1.0米处 <65分贝 | ||||
仪器尺寸 | 约 49 x 58 x 43 cm (19 x 23 x 17 in.)，包括溶液瓶 | ||||
重量 | 约 33 公斤 (73 磅) | ||||
仅供研究使用，不得用于临床诊断。
