Cuantificación rápida y precisa de proteínas
Los kits de ensayo Qubit de proteínas se han diseñado para facilitar la cuantificación de proteínas al tiempo que proporcionan una cuantificación precisa. Para llevar a cabo los ensayos Qubit de proteínas únicamente son necesarios de 10 a 15 minutos de incubación a temperatura ambiente, lo que elimina largos períodos de incubación o la exposición a temperaturas elevadas.
Dado que los rangos de concentración se superponen, ambos kits en conjunto ofrecen precisión en las concentraciones de muestra iniciales desde 12,5 μg/mL a 20 mg/mL y presentan un nivel bajo de variación entre proteínas. Los contaminantes comunes, como reactivos reductores (DTT, β-mercaptoetanol), sales, nucleótidos libres, aminoácidos, disolventes, el ADN y los detergentes (en el ensayo Qubit BR de proteínas) se toleran bien en los ensayos. Otros contaminantes pueden requerir ligeras modificaciones en el procedimiento.
Nota:Mientras que el ensayo Qubit de proteínas se ejecuta en los fluorímetros Qubit 4 y Flex, el ensayo Qubit BR de proteínas solo se lleva a cabo en el modelo Qubit 4.
Ensayos de cuantificación de proteínas en un solo vistazo
Función | ||
Apropiado para | Un amplio intervalo de concentraciones y tipos de proteínas | Análisis de muestras diluidas, <100 µg/mL |
Plataforma compatible | Qubit 4 Fluorometer | Qubit Flex, Qubit 4 Fluorometer* |
Características | Ensayo sencillo y rápido con curva estándar de 2 puntos | Ensayo sencillo y rápido con curva estándar de 3 puntos |
Volumen de muestra necesario | 10 o 20 µL | 1-20 μL |
Compatibilidad | Detergentes | Agentes reductores (p. ej. TCEP, TDT) |
Incompatibilidades | Glicina | Detergentes (por ejemplo, SDS, Tween 20, Triton X-100) |
Intervalo inicial de muestras | De 100 µg/mL a 20 mg/mL | De 12,5 µg/mL a 5 mg/mL |
Intervalo de cuantificación | 1-400 µg | 0,25-5 µg |
N.º de cat. |
* El ensayo Qubit de proteínas también es compatible con modelos Qubit antiguos, Qubit 2 y Qubit 3.
Amplio intervalo dinámico
El amplio intervalo dinámico de los ensayos Qubit de proteínas, en comparación con ensayos estándar como los ensayos Bradford, permite utilizar la mayoría de las muestras sin diluir. De este modo, se eliminan las hipótesis y los pasos de dilución que acompañan a los métodos tradicionales de cuantificación de proteínas.
Los ensayos Qubit de proteínas proporcionan un rango dinámico mucho más amplio que los ensayos de cuantificación de proteínas estándar, como los ensayos Bradford. El ensayo Qubit de proteínas puede cuantificar con precisión proteínas hasta 12,5 µg/mL, mientras que el ensayo Qubit de proteína BR (compatible con el Qubit 4 Fluorometer) tiene un intervalo de cuantificación de hasta 20 000 µg/mL.
Cuantificación rápida y sencilla
Los ensayos Qubit de proteínas se llevan a cabo y se configuran de forma sencilla con solo preparar dos o tres patrones, a diferencia de los ensayos tradicionales, que normalmente requieren una curva estándar de 5 a 7 puntos para la cuantificación de proteínas.
Cuantificación exacta de proteínas
Las proteínas son diversas en su composición y estructura. Las diferencias en la secuencia de aminoácidos, el punto isoeléctrico (pI), la estructura secundaria y las cadenas laterales o los grupos protésicos pueden dar lugar a variaciones en la cantidad cuantificada. El Qubit Protein BR Assay ofrece una cuantificación exacta de proteínas con una variabilidad entre proteínas baja en comparación con los ensayos tradicionales, como el ensayo Bradford.
Al cargar un gel de electroforesis en el análisis western blot para estudiar la expresión de proteínas, es esencial que la carga de proteínas sea exacta. En este experimento, se utilizaron el Qubit Protein BR Assay y un Bradford Protein Assay tradicional para determinar una carga de proteínas de 10 µg en cinco lisados celulares diferentes. El No-Stain Protein Label Reagent sirvió para calcular las cargas totales de carriles de proteínas en el iBright FL 1500 Imaging System. El Qubit Protein BR Assay determinó con exactitud la concentración de proteínas de los lisados con un coeficiente de variación (CV) del 11 % entre cargas, mientras que el ensayo Bradford mostró una mayor variabilidad con un CV del 28 %.
Tabla de compatibilidad de tampones
Compatibilidad con ensayos Qubit de proteínas con componentes de tampón comunes
Contaminante | Qubit Protein BR Assay | Qubit Protein Assay |
Concentración compatible en la muestra | ||
Β-mercaptoetanol | 1 mM | 10 mM |
Acetonitrilo | 20 % |
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Sulfato de amonio | 200 mM | 50 mM* |
Bicina | 100 mM |
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Borato (50 mM con pH 8,5) | Sin diluir |
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Reactivo B-PER | Sin diluir |
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CHAPS | 5 % |
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Bicarbonato de carbonato | Sin diluir |
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DTT | 5 mM | 10 mM* |
DMSO | 10 % |
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EDTA | 50 mM | 10 mM |
Glucosa | 1 M |
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Glicerol | 10 % | 10 %* |
Guanidina-HCl | 4 M |
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Imidazol | 200 mM | 12,5 mM |
I-PER | Sin diluir |
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Mem-PER | Sin diluir |
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MES | 125 mM |
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MOPS | 100 mM |
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M-PER | Sin diluir |
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Acetato de sodio | 100 mM |
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Acida sódica |
| 10 mM |
Cloruro sódico | 5 M | 200 mM* |
NE-PER (CER) | Sin diluir |
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NE-PER (NER) | Sin diluir |
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NP-40 | 5 % | Ø |
Solución salina tamponada con fosfatos (PBS), pH 7,4 | Sin diluir | 10 mM KPO4, 150 mM NaCl* |
Fosfato de potasio, pH 7,4 |
| 5 mM |
PMSF | 1 mM |
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RIPA | Sin diluir |
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SDS | 5 % | 0,1 %* |
Sacarosa | 20 % | 500 mM |
T-PER | Sin diluir |
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Tricina | 50 mM |
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Solución salina tamponada con Tris (TBS) | Sin diluir |
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Tris-glicina, pH 8,0 | Ø |
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Tris-glicina SDS, pH 8,3 | Ø |
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Tris-HCl | 500 mM |
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Tris-HEPES SDS, pH 8,0 | Sin diluir |
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Triton X-100 | 5 % | Ø |
Tween 20 | 3 % | Ø |
Urea | 3 M |
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Y-Per | Ø |
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GPCR Extraction & Stabilization Reagent | 1:2 |
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Cell Surface Protein Isolation Kit | Sin diluir |
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* Un resultado aceptable, pero con cierta distorsión de la curva estándar. Para obtener mejores resultados, añada la misma cantidad de contaminante a las muestras estándar.
Método El Qubit Protein BR Assay y el Qubit Protein Assay se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones con muestras de 1000 µg/mL de BSA que contienen tampones y contaminantes utilizados habitualmente. Los ensayos se realizaron por triplicado y los valores de UFR se compararon con los de BSA en NaCl al 0,9 %, NaN3 al 0,05 %. El ensayo se consideró compatible con la sustancia probada a la concentración indicada si el error en la estimación de la concentración de proteínas que provocaba la presencia de la sustancia era inferior al 10 %. Las concentraciones indicadas se refieren a la concentración real en la muestra de proteínas. Ø denota compuestos que no eran compatibles con la concentración más baja probada. Los campos en blanco indican que los compuestos no se probaron con ese ensayo.
Formulaciones de tampón que se usan en las pruebas de compatibilidad
Tampón | Formulación |
Bicarbonato de carbonato de sodio, pH 9,4 | 0,2 M de bicarbonato de carbonato de sodio, pH 9,4 |
Solución salina tamponada con fosfatos (PBS) | 100 mM de fosfato sódico, 150 mM de NaCl, pH 7,2 |
Tampón RIPA | 25 mM Tris, 150 mM NaCl, 1 % DOC, 1 % NP-40, 0,1 % SDS, pH 7,6 |
Solución salina tamponada con Tris (TBS) | 25 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7,4 |
Tris-glicina, pH 8,0 | 25 mM Tris, 192 mM glicina, pH 8,0 |
Tris-glicina-SDS, pH 8,3 | 25 mM Tris, 192 mM glicina, 0,1 % SDS, pH 8,3 |
Tris-HEPES-SDS | 100 mM Tris, 100 mM HEPES, 3 mM SDS |
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.