Sanger Sequencing Workflow | Thermo Fisher Scientific

Gere os dados de Sequenciamento Sanger de alta qualidade com o nosso workflow comprovado

O nosso fluxo de trabalho simples e rápido de sequenciação Sanger pode ser concluído em menos de um dia de trabalho, desde a amostra até a resposta. A Thermo Fisher Scientific oferece produtos Applied Biosystems para suportar muitos passos do nosso fluxo de trabalho recomendado, desde a amplificação PCR até a análise de dados. Saiba mais sobre cada passo do nosso fluxo de trabalho de sequenciação Sanger recomendado abaixo e compre parte do workflow com 12% de desconto.

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Vídeo: Veja como realizar o Sequenciamento Sanger

BigDye™

Workflow (Fluxo de Trabalho)

Amplificação por PCR

Ferramenta de desenho de primers para PCR e sequenciação Sanger

Utilize a nossa ferramenta online Invitrogen™ Primer Designer™ para procurar o par de primers de sequenciação PCR/Sanger adequado a partir de uma base de dados de ~650.000 pares de primers pré-desenhados para a ressequenciação do exoma humano e do genoma mitocondrial humano. Escolha entre diferentes comprimentos de amplicon para acomodar várias aplicações de investigação e tipos de amostras biológicas.

Nossos primers são livres de SNPs e primer-dimers conhecidos, altamente específicos do alvo e usados em condições universais de PCR
Cobertura completa de primers para o fluxo de trabalho de confirmação Sanger do Ion Torrent™ AmpliSeq™ Exome Panel e Ion Torrent™ AmpliSeq™ Cancer Hotspot Panel v.2
Configuração flexível de primers para atender às suas necessidades de pesquisa: os primers podem ser encomendados não modificados, com cauda M13, purificados por HPLC ou dessalinizados
Todos os primers foram verificados por espectrometria de massa e passaram por métricas bioinformáticas rigorosas; os testes de validação em bancada de laboratório mostraram uma taxa de sucesso >95%

Visite a ferramenta ›

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase

A Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase da Invitrogen ajuda-o a realizar reações de sequenciação mais rapidamente. Uma combinação única de tampão inovador, Taq DNA polimerase de alto desempenho e a superior tecnologia Platinum Hot-Start ajuda a obter resultados excepcionais de PCR, mesmo nas aplicações mais difíceis.

O recozimento universal de primers a 60°C permite o co-ciclo de todos os ensaios, reduzindo os tediosos passos de otimização
Uma Taq polimerase projetada permite uma síntese de DNA 4X mais rápida, resistência a inibidores e amplificação robusta
A tecnologia de arranque a quente de platina oferece especificidade, sensibilidade e rendimentos superiores e permite a preparação da reação à temperatura ambiente
O formato de mistura principal 2X ajuda a reduzir os erros de pipetagem com menos passos de pipetagem

Mais formatos e informações estão disponíveis em thermofisher.com/platinumiitaq

Limpeza de PCR

ExoSAP-IT Express Reagente ExoSAP-IT Express: o método de limpeza de PCR mais rápido

O reagente ExoSAP-IT Express da Applied Biosystems oferece tempos de resposta rápidos e maior eficiência na utilização de recursos, proporcionando a mesma limpeza superior que o reagente ExoSAP-IT original. Elimine as colunas de centrifugação, as beads magnéticas, a sedimentação, a filtração e a purificação em gel. A nova tecnologia ExoSAP-IT permite uma redução significativa do tempo de limpeza da amostra com passos mínimos, proporcionando o fluxo de trabalho mais simples.

Protocolo de 5 minutos
Limpeza de PCR num só tubo e num só passo
Nova tecnologia enzimática
100% de recuperação de produtos PCR

Vídeo: Como Limpar Reações PCR com o Reagente ExoSAP-IT Express

Saiba mais sobre os Reagentes ExoSAP-IT›

Também disponível:
Reagente ExoSAP-IT original
HT ExoSAP-IT Limpeza de produtos de PCR de alto rendimento

Sequenciamento de ciclos

Continuamos a desenvolver kits de sequenciação Sanger de qualidade superior que ajudam a fornecer soluções para todas as suas aplicações e modelos.

Kit de Sequenciação de Ciclo Direto BigDye

O kit BigDye Direct Cycle Sequencing da Applied Biosystems simplifica o fluxo de trabalho de sequenciação Sanger padrão da indústria, combinando a limpeza pós-PCR e a sequenciação de ciclos num único passo. O kit BigDye Direct Cycle Sequencing requer primers PCR com caudas M13, que estão disponíveis na Primer Designer Tool.

Vídeo: Sequenciação com o Kit de Sequenciação de Ciclo Direto BigDye

BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit

Criado por especialistas e aperfeiçoado por equipas globais, o kit de sequenciação de ciclo BigDye Terminator v3.1 oferece uma versatilidade excepcional e um elevado desempenho. Trata-se de uma solução abrangente e exaustiva, criada para sequenciação de novo, resequenciação e finalização com produtos PCR, plasmídeos, fosmídeos e modelos BAC.

Melhoria da qualidade dos resultados e das taxas de sucesso, especialmente com modelos difíceis

Adequado para uma vasta gama de aplicações de sequenciação
Optimizado para comprimentos de leitura longos
Características sofisticadas de mobilidade do corante
Leitura de desempenho refinado através de regiões ricas em GT
Equilíbrio de sinal ótimo
Conclusão rápida de projetos de sequenciação

Saiba mais sobre o Kit de Sequenciamento de Ciclo BigDye Terminator v3.1 ›

BigDye Terminator v1.1 Cycle Sequencing Kit

O kit de sequenciação de ciclos BigDye Terminator v1.1 da Applied Biosystems foi concebido para aplicações especiais que requerem uma escalada de base ideal adjacente ao iniciador e para sequenciar modelos de produtos PCR curtos com módulos de execução de eletroforese rápida.

Saiba mais sobre o kit BigDye Terminator v1.1 Cycle Sequencing ›

Limpeza de sequenciação

Kit de purificação BigDye XTerminator

O Applied Biosystems BigDye XTerminator Purification Kit fornece um método de purificação rápido e simples para reações de sequenciação de DNA para remover terminadores BigDye não incorporados e sais. Não há mais manchas de corante! A limpeza é concluída em menos de 40 minutos e normalmente requer menos de 10 minutos de trabalho.

Vídeo: Como Purificar Reações de Sequenciamento com o Kit BigDye XTerminator

Saiba mais sobre o kit BigDye XTerminator ›

Eletroforese capilar

Uma gama de plataformas para satisfazer as suas necessidades de produtividade

Throughput	Low	Medium	Medium	High
	Learn more	Learn more	Learn more	Learn more

Os consumíveis no instrumento são componentes críticos da sua execução de sequenciação. A utilização dos produtos Applied Biosystems corretos pode ajudar a reduzir a sua taxa de repetição e permite obter dados reprodutíveis e de elevada qualidade.

Cartucho SeqStudio

O cartucho SeqStudio da Applied Biosystems é um cartucho de reagentes fácil de utilizar que inclui capilares, polímero universal POP-1, tampão e bomba. O polímero universal POP-1 permite flexibilidade para efetuar sequenciação Sanger e análise de fragmentos no sistema SeqStudio Genetic Analyzer com um cartucho. Basta carregar as amostras, clicar no cartucho e pronto.

Procurar outros consumíveis no instrumento

Capilares
Polímeros
Tampões e produtos químicos

Vídeo: Como configurar uma execução de sequenciação Sanger ou de análise de fragmentos

Análise de dados

Software de pesquisa de variantes menores

A sensibilidade melhorada obtida com a utilização do software gratuito Applied Biosystems Minor Variant Finder torna a sequenciação Sanger a escolha ideal para oncologistas e/ou patologistas para identificar variantes somáticas de baixa frequência (5% ou menos) em que o número de alvos relevantes é frequentemente limitado. O software não requer qualquer alteração ao seu atual fluxo de trabalho de sequenciação Sanger.

As vantagens incluem:

Identificar variantes menores a um nível de deteção tão baixo como 5%
Sequenciar um número moderado de alvos a baixo custo
Confirmar os resultados da sequenciação de nova geração na vista de alinhamento e no diagrama de Venn

Vídeo: Como detectar variantes menores utilizando a sequenciação Sanger

Módulos de Análise Sanger - ferramentas gratuitas baseadas na nuvem

Os Módulos de Análise Sanger da Applied Biosystems são ferramentas inovadoras e GRATUITAS de análise de dados secundários baseadas na nuvem que reúnem vários conjuntos de dados num único local conveniente. Esta solução online facilita a visualização, o armazenamento e a análise de dados de sequenciação Sanger.

As principais características incluem:

Confirmação de sequenciação de nova geração (NGS) - uma localização central para confirmar as suas variantes NGS
Relatório de variantes em coordenadas genômicas absolutas - elimina a necessidade de calcular a partir da referência
Pesquisa automatizada na base de dados - relatório automático de anotações genômicas para SNPs
. Saída .vcf para análise downstream - pesquise vários bancos de dados com o fluxo de trabalho de anotação do Ion Reporter

Mais informações sobre o software de sequenciação Sanger e análise de fragmentos ›

Sanger Sequencing Kit

The Applied Biosystems Sanger Sequencing Kit provides a convenient and affordable solution for preparing sequencing reactions. The kit provides all reagents needed for PCR cleanup, cycle sequencing, and sequencing product cleanup. Learn more ›

What makes a gold standard sequencing product?

Gold standard represents quality and dependability. We commit to quality to help ensure results you can rely on.
Learn more ›

Sanger sequencing chemistry guide

A perfect handbook for scientists and researchers using Sanger sequencing. In this chemistry guide, you will learn the basic principles of Sanger sequencing from workflow to applications.