ELISA plate detecting HRP with TMB substrate (blue) and color changing to yellow upon addition of sulfuric acid

TMB 底物和其他试剂

寻找用于 ELISA 的 HRP 和其他酶底物，其中不同灵敏度检测方法包括光吸收法、化学发光和荧光检测。

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本页内容：


ELISA应用的显色底物

为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）的 ELISA 应用寻找不同比色（显色）底物，以满足您的灵敏度和实验需求。

底物酶优势、规格货号（总次数¹）吸光度和颜色检测限²推荐的一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
TMB （3,3',5,5'-四甲基联苯胺）
1-Step Ultra TMBHRP最敏感的显色底物，即用型34028
（2500 孔）		450nm（650nm）黄色（蓝色）~2 pg/孔
（20 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
1-Step Slow TMBHRP动力学研究的理想底物，即用型34024
（2500 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~8 pg/孔
（80 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
1-Step Turbo TMBHRP在 5-30 分钟内快速检测 HRP 活性，即用型34022
（2500 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~7 pg/孔
（70 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
TMB 底物试剂盒HRP两部分试剂盒34021
（4000 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~6 pg/孔
（60 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
TMB 发色溶液HRP即用型00-2023 (500 mL)450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		  
ABTS （2,2'-谷氨酰胺[3-乙基苯并噻唑-6-磺酸]-二铵盐
1-Step ABTS 底物溶液HRP即用型37615
（2000 孔）		410 nm (650 nm)
绿色		~250 pg/孔
（2.5 ng/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
OPD（邻苯二胺二盐酸盐）
OPD 底物HRP已知重量片剂34006（片剂）
34005 (25 g)		490 nm (450 nm)
绿色（橙色）		~7 pg/孔
（70 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
PNPP （对硝基苯磷酸盐）
1-Step PNPP 底物溶液AP即用型37621
（1000 孔）		405 nm
黄色		~10 ng/孔
（100 ng/mL）		1°- 1:500
2°-1:5,000 到 1:20,000
PNPP 底物AP预称重片剂37620
（105片，缓冲液试剂盒）
34047
（105 片）
34045
（25 g）		405 nm
黄色		~10 ng/孔
（100 ng/mL）		1°- 1:500
2°-1:5,000 到 1:20,000
ONPG（邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷）
ONPG 底物Gal 34055 (5 g)410 nm
黄色		~10 ng/孔（100 ng/mL）1°- 1:500
2°- 1:5,000

¹ 参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。


显色 ELISA 底物一览

TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）可溶性底物检测 HRP 时会产生蓝色。反应产物最大吸收波长为370 nm 和652 nm。然后在加入硫酸或磷酸（终止液）时，颜色变为黄色，最大吸收波长位于450 nm。TMB 非常灵敏，如果使用太多蛋白质或抗体，可能会产生明显的背景信号。TMB 与其他 HRP 底物相比会被更快氧化，因此可以更快显色。

ABTS（2,2’-联氨-双-[3乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐）用于检测 HRP 并生成水溶性绿色反应终产物。绿色产物有两个主要吸收峰——410 nm 和650 nm。对于 HRP 检测，ABTS 灵敏度低于 OPD 和 TMB 底物。如果使用OPD或TMB底物由于灵敏度较高可能会导致高背景，但显色缓慢（约20分钟）可缓解此高背景。ABTS 提供片剂或即用型。

OPD（邻苯二胺二盐酸盐）用于检测 HRP 并生成水溶性黄橙色反应产物。反应产物最大吸收波长为492 nm。OPD 提供粉末或片剂形式，通过溶解于稳定的过氧化物底物缓冲液或过氧化氢缓冲液中可轻松制备。

PNPP（对硝基苯磷酸二钠盐）是在 ELISA 应用中检测碱性磷酸酶时广泛使用的底物。PNPP 产生黄色的水溶性反应产物，可吸收405 nm 的光。PNPP 可提供结晶性粉末、5 mg 片剂或即用型等规格。


化学发光 ELISA 底物

我们提供多种化学发光底物，用于适用辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）的 ELISA 研发：

酶 底物货号
（总次数¹）		Emax³ Color检测限²一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
HRPSuperSignal ELISA Pico37070（1000孔）
37069（2500孔）		425 nm
蓝色/绿色		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:10,000到1:50,000
HRPSuperSignal ELISA Femto37075（1000孔）
37074（2500孔）		425 nm
蓝色/绿色		~ 170 fg/孔
（1.7 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:50,000 至 1:100,000
APCDP-Star 底物T2145（50mL）
T2147（250mL）		475 nm  
APCSPD 底物T2141（50mL）
T2143（250mL）		475 nm  
APDynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer4475406（100 mL）
4475410 (1L)		 ~1 pg/mL 

¹ 基于96孔板的检测总数。参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。
³ 提供峰值发射波长供参考。但是，为了获得最佳灵敏度，请使用酶标仪测量总化学发光。


化学发光 ELISA 底物一览

CSPD 和 CDP-Star 是化学发光的1,2-二氧杂环丁烷碱性磷酸酶底物，在475 nm波长处发出最大光强的光。这些底物是“闪光”底物，仅在 15-60 分钟后随时间提供持续的最大信号，具体取决于温度。以含水缓冲液形式（分别）提供5或25 mM。添加 Sapphire-II 或 Emerald-II 发光增强剂可以提高灵敏度。

含 RapidGlow 增强剂的 DynaLight 底物是一种即用型化学发光底物配方，经过优化后可在溶液法检测中更快获得结果。该底物被归类为闪光和辉光底物，可在 2-10分钟内提供快速且持续的最大信号。含 RapidGlow 增强剂配方的 DynaLight 底物包括1,2-二氧杂环丁烷化学发光底物和聚合物增强剂，能够通过碱性磷酸酶标记实现超灵敏免疫检测。

SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物处理大量靶蛋白时性能卓越，容易优化，检测灵敏度高于入门级显色底物。快速生成信号，5-30分钟实现信号稳定，视 HRP 浓度而定。

SuperSignal ELISA Femto 最大灵敏度底物是可用于 ELISA 应用的最灵敏的底物之一。经过适当优化后，更低检测限为比常用显色底物低1到10个数量级。但是，未经过适当优化，蛋白质和酶容易导致高背景和负数结果。


荧光 ELISA 底物

我们为使用辣根过氧化物酶（HRP）进行 ELISA 显色提供多种化学荧光底物：

酶底物货号（总次数¹）Emax/Amax（发射/激发）检测限²一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
HRPQuantaBlu Fluorogenic 底物15169（2700孔）420 nm/
325 nm		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:500
2° 1:5,000到1:20,000
HRPQuantaBlu 荧光动力学底物15162（2700孔）420 nm/
325 nm		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:500
2° 1:5,000到1:20,000
HRPQuantaRed 增强型化学荧光底物15159（1000孔）585 nm/
570 nm		~ 400 fg/孔
（4 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:5,000到1:20,000
HRPAmplex Red 试剂A12222（200次检测）571 nm/
585 nm		  
HRPAmplex UltraRed 试剂A36006（3400 rxns）490–550 nm/
580–590 nm		  

¹ 参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。


荧光 ELISA 底物一览

QuantaBlu荧光底物具有较宽的线性检测范围和检测HRP的低浓度线性。稳定的荧光反应产物的 Emax/Amax 为420 nm/325 nm，允许执行终止、非终止和动力学检测；优于更灵敏的化学发光底物。

QuantaRed 增强型化学荧光底物是可用于 HRP 检测的最灵敏的荧光 ELISA 底物。终止反应时，荧光反应产物（resorufin）可稳定4小时，Emax/Amax 为585 nm/570 nm。红移的resorufin反应产物允许在波长下进行检测，而生物样品中可能出现的自发荧光干扰较少。

Amplex Red 试剂 是一种高灵敏度的稳定 H2O2 探针。因为很多不同的酶促反应中都会产生 H2O2，所以 Amplex Red 试剂可检测许多不同酶（Amplex Red 检测试剂盒）

Amplex UltraRed 试剂改善了 Amplex Red 试剂的性能，在过氧化物酶或过氧化物酶偶联检测中，每一摩尔都能提供更亮的荧光和增强的灵敏度。
 

酶底物


ELISA应用的显色底物

为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）的 ELISA 应用寻找不同比色（显色）底物，以满足您的灵敏度和实验需求。

底物酶优势、规格货号（总次数¹）吸光度和颜色检测限²推荐的一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
TMB （3,3',5,5'-四甲基联苯胺）
1-Step Ultra TMBHRP最敏感的显色底物，即用型34028
（2500 孔）		450nm（650nm）黄色（蓝色）~2 pg/孔
（20 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
1-Step Slow TMBHRP动力学研究的理想底物，即用型34024
（2500 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~8 pg/孔
（80 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
1-Step Turbo TMBHRP在 5-30 分钟内快速检测 HRP 活性，即用型34022
（2500 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~7 pg/孔
（70 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
TMB 底物试剂盒HRP两部分试剂盒34021
（4000 孔）		450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		~6 pg/孔
（60 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
TMB 发色溶液HRP即用型00-2023 (500 mL)450 nm (652 nm)
黄色（蓝色）		  
ABTS （2,2'-谷氨酰胺[3-乙基苯并噻唑-6-磺酸]-二铵盐
1-Step ABTS 底物溶液HRP即用型37615
（2000 孔）		410 nm (650 nm)
绿色		~250 pg/孔
（2.5 ng/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
OPD（邻苯二胺二盐酸盐）
OPD 底物HRP已知重量片剂34006（片剂）
34005 (25 g)		490 nm (450 nm)
绿色（橙色）		~7 pg/孔
（70 pg/mL）		1°- 1:1,000
2°-1:5,000 到 1:50,000
PNPP （对硝基苯磷酸盐）
1-Step PNPP 底物溶液AP即用型37621
（1000 孔）		405 nm
黄色		~10 ng/孔
（100 ng/mL）		1°- 1:500
2°-1:5,000 到 1:20,000
PNPP 底物AP预称重片剂37620
（105片，缓冲液试剂盒）
34047
（105 片）
34045
（25 g）		405 nm
黄色		~10 ng/孔
（100 ng/mL）		1°- 1:500
2°-1:5,000 到 1:20,000
ONPG（邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷）
ONPG 底物Gal 34055 (5 g)410 nm
黄色		~10 ng/孔（100 ng/mL）1°- 1:500
2°- 1:5,000

¹ 参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。


显色 ELISA 底物一览

TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）可溶性底物检测 HRP 时会产生蓝色。反应产物最大吸收波长为370 nm 和652 nm。然后在加入硫酸或磷酸（终止液）时，颜色变为黄色，最大吸收波长位于450 nm。TMB 非常灵敏，如果使用太多蛋白质或抗体，可能会产生明显的背景信号。TMB 与其他 HRP 底物相比会被更快氧化，因此可以更快显色。

ABTS（2,2’-联氨-双-[3乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐）用于检测 HRP 并生成水溶性绿色反应终产物。绿色产物有两个主要吸收峰——410 nm 和650 nm。对于 HRP 检测，ABTS 灵敏度低于 OPD 和 TMB 底物。如果使用OPD或TMB底物由于灵敏度较高可能会导致高背景，但显色缓慢（约20分钟）可缓解此高背景。ABTS 提供片剂或即用型。

OPD（邻苯二胺二盐酸盐）用于检测 HRP 并生成水溶性黄橙色反应产物。反应产物最大吸收波长为492 nm。OPD 提供粉末或片剂形式，通过溶解于稳定的过氧化物底物缓冲液或过氧化氢缓冲液中可轻松制备。

PNPP（对硝基苯磷酸二钠盐）是在 ELISA 应用中检测碱性磷酸酶时广泛使用的底物。PNPP 产生黄色的水溶性反应产物，可吸收405 nm 的光。PNPP 可提供结晶性粉末、5 mg 片剂或即用型等规格。


化学发光 ELISA 底物

我们提供多种化学发光底物，用于适用辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）的 ELISA 研发：

酶 底物货号
（总次数¹）		Emax³ Color检测限²一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
HRPSuperSignal ELISA Pico37070（1000孔）
37069（2500孔）		425 nm
蓝色/绿色		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:10,000到1:50,000
HRPSuperSignal ELISA Femto37075（1000孔）
37074（2500孔）		425 nm
蓝色/绿色		~ 170 fg/孔
（1.7 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:50,000 至 1:100,000
APCDP-Star 底物T2145（50mL）
T2147（250mL）		475 nm  
APCSPD 底物T2141（50mL）
T2143（250mL）		475 nm  
APDynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer4475406（100 mL）
4475410 (1L)		 ~1 pg/mL 

¹ 基于96孔板的检测总数。参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。
³ 提供峰值发射波长供参考。但是，为了获得最佳灵敏度，请使用酶标仪测量总化学发光。


化学发光 ELISA 底物一览

CSPD 和 CDP-Star 是化学发光的1,2-二氧杂环丁烷碱性磷酸酶底物，在475 nm波长处发出最大光强的光。这些底物是“闪光”底物，仅在 15-60 分钟后随时间提供持续的最大信号，具体取决于温度。以含水缓冲液形式（分别）提供5或25 mM。添加 Sapphire-II 或 Emerald-II 发光增强剂可以提高灵敏度。

含 RapidGlow 增强剂的 DynaLight 底物是一种即用型化学发光底物配方，经过优化后可在溶液法检测中更快获得结果。该底物被归类为闪光和辉光底物，可在 2-10分钟内提供快速且持续的最大信号。含 RapidGlow 增强剂配方的 DynaLight 底物包括1,2-二氧杂环丁烷化学发光底物和聚合物增强剂，能够通过碱性磷酸酶标记实现超灵敏免疫检测。

SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物处理大量靶蛋白时性能卓越，容易优化，检测灵敏度高于入门级显色底物。快速生成信号，5-30分钟实现信号稳定，视 HRP 浓度而定。

SuperSignal ELISA Femto 最大灵敏度底物是可用于 ELISA 应用的最灵敏的底物之一。经过适当优化后，更低检测限为比常用显色底物低1到10个数量级。但是，未经过适当优化，蛋白质和酶容易导致高背景和负数结果。


荧光 ELISA 底物

我们为使用辣根过氧化物酶（HRP）进行 ELISA 显色提供多种化学荧光底物：

酶底物货号（总次数¹）Emax/Amax（发射/激发）检测限²一抗（1°）和二抗（2°）稀释液²
HRPQuantaBlu Fluorogenic 底物15169（2700孔）420 nm/
325 nm		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:500
2° 1:5,000到1:20,000
HRPQuantaBlu 荧光动力学底物15162（2700孔）420 nm/
325 nm		~ 500 fg/孔
（5 pg/mL）		1° 1:500
2° 1:5,000到1:20,000
HRPQuantaRed 增强型化学荧光底物15159（1000孔）585 nm/
570 nm		~ 400 fg/孔
（4 pg/mL）		1° 1:1,000
2° 1:5,000到1:20,000
HRPAmplex Red 试剂A12222（200次检测）571 nm/
585 nm		  
HRPAmplex UltraRed 试剂A36006（3400 rxns）490–550 nm/
580–590 nm		  

¹ 参阅产品说明了解补充信息和确定检测次数。
² 检测限和建议抗体稀释度（基于1 mg/mL 储备液）是常规的优化手段。个别检测可能需要超出文中建议范围的条件。


荧光 ELISA 底物一览

QuantaBlu荧光底物具有较宽的线性检测范围和检测HRP的低浓度线性。稳定的荧光反应产物的 Emax/Amax 为420 nm/325 nm，允许执行终止、非终止和动力学检测；优于更灵敏的化学发光底物。

QuantaRed 增强型化学荧光底物是可用于 HRP 检测的最灵敏的荧光 ELISA 底物。终止反应时，荧光反应产物（resorufin）可稳定4小时，Emax/Amax 为585 nm/570 nm。红移的resorufin反应产物允许在波长下进行检测，而生物样品中可能出现的自发荧光干扰较少。

Amplex Red 试剂 是一种高灵敏度的稳定 H2O2 探针。因为很多不同的酶促反应中都会产生 H2O2，所以 Amplex Red 试剂可检测许多不同酶（Amplex Red 检测试剂盒）

Amplex UltraRed 试剂改善了 Amplex Red 试剂的性能，在过氧化物酶或过氧化物酶偶联检测中，每一摩尔都能提供更亮的荧光和增强的灵敏度。
 

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