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MIGRATED CONTENT FOR REFERENCE BEGINS
高速相机选项和自动化图像处理改变了流式细胞分析
- 声波聚焦流体技术使 Attune 流式细胞仪能够达到较高的灵敏度，即使样本流速很快（高达 1000 µL/min）亦然。
- Attune CytPix 型号新增了高速明场相机，可在细胞通过流通池时捕捉其图像，即使流速很快也能实现
- 除了标准流式细胞分析参数外，图像分析软件还可同步测量细胞形态学参数
高速相机
Attune CytPix 成像型流式细胞仪的主要特点在于高速明场相机，能够实时记录经过流动室的单个细胞的图像。借助相机和 Attune 流式细胞仪软件，用户能够目视确认检测器记录的事件为单个细胞而非双联体、团块或碎片。这对于细胞和基因治疗研究应用至关重要，不仅如此，对几乎所有流式细胞分析实验也很有用，可帮助用户评估样本质量、优化方案并记录每个已鉴别细胞群的形态以供分析。
无需更改现有流式实验方案或牺牲样本通量，一次实验即可同时得到流式数据和成像结果。Attune CytPix 成像型流式细胞仪在保持标准流式细胞仪采集速度的同时还可采集清晰的细胞图像。 声波聚焦可将待测细胞精确排列在激光检测区的中心位置，从而有助于获得清晰、居中的细胞图像。
通过使用图库视图，用户可以快速扫视细胞群，看是否存在异常情况。 在此视图中，双联体和其他聚合体比较显眼，即使粗略一看也能注意到。借助 Attune CytPix 成像型流式细胞仪，用户可以非常快速地突出显示大细胞群的结构特征。 这样就可以调整设门，可在圈定感兴趣细胞的同时排除聚合体、不需要的细胞和碎片。
与传统多色流式相比，图像中的形态信息增加了流式数据的丰度。例如，图中显示了使用 Annexin V 和碘化丙啶 (PI) 的常规细胞凋亡测定，以细胞成像结果更好地显示各细胞群中细胞的不同形态特征。单凭流式细胞分析数据是无法得出这些结果的。
声波聚焦技术与高灵敏度
Attune 流式细胞仪将医疗成像中的超声波技术与流体动力学聚焦相结合，能够将样本呈单个细胞状态精确排列到鞘液流的中心。因为每个样本细胞都准确地聚焦在激光检测区，仪器可以采集更多的光子，所以无论样本与鞘液的比例是多少，都能够保证数据的准确性。
声波聚焦技术有助于在 Attune CytPix 仪器上进行细胞成像，帮助精确定位细胞，从而获得清晰的图像。 正如这些视频所演示，没有采用声波聚焦拍摄的细胞图像模糊不清且位置不正确，而采用声波聚焦拍摄的细胞图像清晰且处于视野中心。
声波聚焦使得细胞处于最佳成像位置
没有采用声波聚焦技术（左）时，微球没有聚集在中心位置且经常模糊不清。 开启声波聚焦技术后（右），细胞的横向位置变化、时间变化和视野限制深度都会变小，从而可获得清晰的图像。
快速、准确地进行数据采集
声波聚焦技术还可使实验室快速获得高质量数据。 用户可以达到 12.5 µL/min 或 1,000 µL/min 的样本处理速率，比传统的流体动力学聚焦系统快 10 倍，而采集速度可达 35,000 个事件/秒。这意味着，可以更快、更准确地处理所有样本（包括低浓度和珍贵样本），同时较大限度地避免数据质量下降。
无论进样速度如何，声波聚焦技术都可以保证数据具有最小的变异系数，因此高通量和灵敏度可以同时兼得。下面的细胞周期实验示例就证明了这一点，对于周期实验来说，精确检测多个细胞亚群之间的荧光强度差异至关重要。
稀有细胞检测
检测稀有细胞需要采集大量细胞才能获得准确、可靠的结果。Attune 流式细胞仪可在最高 1 mL/分钟的进样速度下快速处理稀释样本，显著快于最快进样速度仅为 60–100 μL/分钟的传统流式细胞仪。因此，声波聚焦技术可同时兼顾进样速度和数据质量，大大缩短了稀有细胞的样本采集时间。
Attune 流式细胞仪可以兼顾高采集速度和高灵敏度，使用户能够轻松检测稀有细胞并对其进行表型鉴定和功能分析。 流式学习中心中关于稀有细胞检测的应用指南描述了适用于实验前、实验中和数据分析阶段的详细操作步骤。
设计灵活性
Attune 流式细胞仪可配置多达 4 个空间独立的激光器，同时检测16 个参数。激光器呈空间立体排布，为多色方案设计提供了染料选择的灵活性，并可以简化补偿过程。 该系统可提供高速进样，采集速度可达每秒 35,000 个细胞，并兼具高灵敏度，可满足各种科研需求。
高灵敏度可以区分弱信号和背景荧光，从而减少数据差异并实现更好的信号分离。单峰的荧光分辨率变异系数小于 3%，MESF ≤80 (FITC)、≤30 (PE)、≤70 (APC)。下面介绍了与竞品仪器之间灵敏度的比较。
Attune 流式细胞仪结构紧凑，可在生物安全柜或超净台内灵活使用。这有助于避免在处理危险或未知样本时造成污染或感染。
全新的光学设计
Attune 流式细胞仪采用全新的光学设计，具有顶级的可靠性和卓越的性能。固态平顶光斑激光器会最大限度减少液流系统或光学系统变化的影响，从而避免仪器的不稳定性、光路校准问题甚至仪器停机。
激光偏移是传统流式细胞仪用户经常遇到的主要问题之一。Attune 流式细胞仪采用平顶光斑激光器，具有更宽更稳定的激光强度分布，与传统系统所用的高斯分布激光器相比，平顶光斑激光器有更宽的光照范围。平顶光斑激光器对激光偏移的容忍度更高，从而确保仪器的高灵敏度和低 CV 值。
抗堵技术
Attune 流式细胞仪采用正向位移注射泵系统，可以精确控制进样体积，从而可以进行精确体积分析，并能有效防止管路堵塞。由于该系统可以精确计算上样体积，所以在数据采集的时候可以同时进行细胞绝对计数，并且可以轻松区分死活细胞，进行活细胞计数。与最大上样压力为 15 PSI 的传统流式细胞仪不同，Attune 流式细胞仪可将压力控制在 75 PSI，从而可以减少细胞黏连，实现抗堵塞功能。
软件功能强大、界面直观
Attune 流式细胞仪软件采用直观、用户友好的操作界面，并提供强大的数据采集和分析功能。可轻松设置、定制和保存实验模板，以供日后研究使用。软件可以进行自动补偿，也可使用操作指南设置手动补偿。该软件旨在最大限度地提高数据分析效率，在您对流式图进行调整时，该软件可以立即发现该变化，从而实时刷新数据（每个样本可采集高达 2000 万个事件）
该软件拥有一些独特的工具，可简化实验设置，包括使用滤光片配置管理工具进行试剂选择。通过从预设好或自定义试剂的下拉菜单中选择相应流式试剂，然后应用到流式图标签中，从而有助于将相应染料与仪器上最适合的荧光通道相匹配。
使用 Attune 流式细胞仪软件6.0版进行图像处理
借助 Attune 流式细胞仪软件6.0版，可以对 Attune CytPix 成像型流式细胞仪生成的明场图像进行自动化图像处理，而且通量较高。高分辨率明场图像就感兴趣的细胞或颗粒提供了更具描述性的特征，如大小、复杂性、质地和形状，这些特征是之前无法与荧光和散射光参数同时获得的。该软件采用了使用白细胞和微珠预培训的机器学习模型，能进行自动化图像处理并从数千个 Attune CytPix 图像快速生成大型测量数据集。 这些数据集会作为源自不同图像的参数提供给用户，以便对照荧光或散射光数据绘图并利用图像进行反向设门。您可选择使用这些参数对样本进行设门，以改进设门策略、验证样本质量、描绘复杂样本及开发新应用。
| 强度特征 |
| 最大强度 |
| 最小强度 |
| 总强度 |
| 平均强度 |
| 强度标准差 |
| 强度 %CV |
| 强度偏斜度 |
| 强度峰态 |
| 强度熵 |
| 形状特征 |
| 面积 (µm2) |
| 周长 (µm) |
| 圆度 (%) |
| 伪直径 (µm) |
| 长轴 (µm) |
| 短轴 (µm) |
| 短轴与长轴比 (%) |
| 偏心率 (%) |
| 系统特征 |
| 在边界上 |
| 置信度评分 |
| 加工级 |
| 可加工 |
| 对象特征 |
| 颗粒/细胞计数 |
| 像素特征 |
| 像素计数 |
Attune 流式细胞仪软件6.0的图像分析功能直观易用，可在用户定义的队列中进行管理。系统能够以每秒高达1,000幅图像的速度处理图像，具体取决于图像大小和复杂性。源自图像的数据可以导出至 FCS 文件。
软件特点
核心功能
- 补偿设置—全自动和手动补偿两种模式
- 仪器状态追踪（仪器质控）—可通过自动的基线校准和性能测试检测所有通道及其线性范围。
- 审计追踪 — 21 CFR 第11部分审计追踪软件具有流式细胞样本数据安全性、审计和电子签名功能
- 文件格式—FCS 3.0 和 FCS 3.1
仪器维护
- 自动维护—开机启动（<15 分钟）、关机、冲洗、清洗、排气泡、深度清洗、月度维护
- 用户账号维护—管理员和个人账号都有用户日志
可视化
- 已成像事件的图库视图
- 利用图像在流式细胞图上进行反向设门
- 将来自特定门的图像可视化
- 设门—标准和自定义设门
- 流式图预览—轻松设置工作区
- 视图缩放浏览器—轻松查看和浏览流式图、设门和流式图属性
- 图形分辨率—文献发表级图像（自定义）
使用 ACS 6.0 & Attune CytPix 成像型流式细胞仪进行图像处理
- 超过25个图像参数的自动图像处理
- 可选择3种处理模型
- 将图像参数与标准流式细胞分析荧光和散射光参数关联起来
补偿工具
使用向导软件系统进行补偿设置，可以快速、准确地解决荧光通道间的光谱重叠问题。 系统可以自动调整补偿值并应用到所有样本，上机检测时只需准备合适的对照及调好电压条件即可。
自动补偿支持阴性或未染色样本参数，而且可根据需要直接从微孔板上设置和采集补偿对照管。自动补偿无需尝试、并且避免人为错误，可以快速准确地设置补偿。此外，如果在设置补偿后需要添加或删除参数，则可在流式图上在线补偿控制工具进行微调，并随后修改补偿值。
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21 CFR Part 11 审计追踪软件（选配）
美国 FDA 于 1997 年 8 月通过了“电子记录和电子签名规定”法案，被称为 21 CFR Part 11。*该法规对使用电子文件代替纸质文件做出了规定。明确规定了确保电子记录可靠性所需的系统要求、控制权限和操作流程。
使用 SAE 控制系统的 Attune 声波聚焦流式细胞仪软件，其软件许可证遵循有关安全性、审计和电子签名的 21 CFR Part 11 FDA 法规。Attune 21 CFR 审计追踪软件仅支持 Windows 10 计算机上的流式细胞分析数据。
* https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/part-11-electronic-records-electronic-signatures-scope-and-application#i（2020 年 2 月 27 日访问）
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| 软件支持管理员通过用户 ID 和密码限制被授权人员的访问。 | 软件允许管理员为密码和用户 ID 设置使用期限。此外，系统将在规定的非活动持续时间后注销用户。 |
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| 必须重新输入用户 ID 和密码才能签署或修改记录。 | 事件通知会在管理员提醒板中自动记录并报告所有伪造尝试。 |
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| 管理员可以通过定义用户角色，以便在各种软件功能和选项上进行细化访问和操作控制。 |
审计功能可跟踪用户执行的操作以及对安全审计电子签名 (SAE) 模块设置的修改。SAE 模块自动以静默方式审计某些操作。管理员可以审计特定用户的操作并指定审计模式，生成已审计用户操作、SAE 模块更改、软件和仪器活动的报告。
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电子签名可以规定用户在执行特定功能之前是否需要满足签名要求。The software allows administrators to configure an e-signature so that a given user can start a run only if the associated data are signed.此外，允许设置电子签名，以便需要多个签名，并且只有指定的角色可以签名。
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| Sign Record（签名记录）功能可以根据需要对记录进行签名。 | 通过创建 PDF 预览来准备电子签名的签名记录。 |
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| 随后，生成待签名的报告。 | 对实验记录进行签名并通知用户，后续编辑可以使电子签名作废。 |
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| Request Signature（申请签名）允许用户申请电子签名。 | 电子签名请求提示可确保为您的文档分配了签名。 |
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| 审批人登录时会得到有电子签名请求的通知，并可查看待处理签名记录。审批人可签署报告并注明签名原因。 |
先进的数据分析软件
赛默飞世尔科技与 De Novo Software 合作提供 FCS Express 流式流式细胞仪软件。FCS Express 软件让您能够从原始数据中获得易于理解、格式简约及现成的结果，比其他流式流式细胞仪软件更容易获得结果且用时更少。该产品包含一年 FCS Express 软件使用许可，可通过数字下载方式获取。
FCS Express 软件的特点包括：
- 完全集成分析、统计、绘图和报告功能
- Microsoft Office 启发型的界面使学习使用变得简单，同时以集成的电子表格和高分辨率的直接导出功能，您可获得最终可发表的结果而无需使用多个软件工具
- 对 Attune 仪器的全面支持，确保从仪器采集数据到最终获得结果的无缝衔接
- 专业且具备丰富知识的支持团队可在不到24小时的时间内响应客户需求
其他配套软件
仅供研究使用，不得用于临床诊断。
