研究人员掌握多种基因递送技术,可将质粒 DNA、siRNA 或双链 RNAi、寡核苷酸和 RNA 导入真核细胞,用于各种研究和药物发现应用。下表对这些技术进行了回顾。
使用阳离子脂质体进行脂质体递送
工作原理:
DNA、siRNA 或寡核苷酸与转染试剂
(市售)在不同试管中进行稀释。




(市售)在不同试管中进行稀释。

合并 DNA 与转染试剂以形成复合物。
阳离子脂质体上的正电荷与核酸上的磷酸盐骨架结合。
阳离子脂质体上的正电荷与核酸上的磷酸盐骨架结合。

将复合物加入细胞中。阳离子脂质体上的正电荷有助于复合物与膜结合。

复合物通过内吞作用进入细胞。

对基因表达或沉默进行测定。
优点
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缺点
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病毒递送
工作原理:
通过基因克隆、细胞培养、病毒分离以及克隆表征
生成重组病毒。




生成重组病毒。

制备和纯化高滴度病毒载体。

以适当的感染复数 (MOI) 感染细胞(包含病毒受体)。

去除病毒和/或添加新鲜培养基。

对基因表达或沉默进行测定。
优点
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缺点
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通过电穿孔递送
工作原理:
让细胞悬浮于电穿孔缓冲液中,使其做好准备。
在专用缓冲液和 DNA 存在的情况下对细胞施以电脉冲。



在专用缓冲液和 DNA 存在的情况下对细胞施以电脉冲。

电脉冲会在膜的两边形成电位差并引发
细胞膜临时穿孔,以便 DNA 进入
细胞膜临时穿孔,以便 DNA 进入

细胞恢复到生长条件。

对基因表达或沉默进行测定。
优点
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缺点
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通过其他化学方法递送,即磷酸钙沉淀、DEAE-右旋糖酐、聚凝胺
工作原理:
制备溶液。混合氯化钙(在磷酸盐缓冲液中)和 DNA。

让含有浓缩 DNA 的极小不溶性微粒沉淀



让含有浓缩 DNA 的极小不溶性微粒沉淀

CaPO
4:在细胞培养物中加入复合物并孵育。
复合物粘附到细胞膜上,并通过内吞作用进入细胞质。
复合物粘附到细胞膜上,并通过内吞作用进入细胞质。

DEAE-右旋糖酐和聚凝胺:
使用 DMSO 或甘油通过渗透压休克法递送复合物。
带正电荷的聚合物复合物与带负电荷的 DNA 分子合力使复合物结合到细胞表面。

使用 DMSO 或甘油通过渗透压休克法递送复合物。
带正电荷的聚合物复合物与带负电荷的 DNA 分子合力使复合物结合到细胞表面。

从细胞中去除复合物,洗涤,然后添加新鲜培养基。

对基因表达或沉默进行测定。

对基因表达或沉默进行测定。
优点
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缺点
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