PCR/qPCR Plastics Troubleshooting Guide

在PCR和qPCR实验中出现问题时，您可能首先尝试对PCR 和 qPCR ）的试剂和仪器设置进行故障排除（相关：故障排除指南）。然后，由于扩增反应是在塑料耗材管中进行的，检查PCR/qPCR塑料耗材是否存在潜在的问题也是很重要的，例如：

本页内容

1.PCR/qPCR问题(塑料耗材相关)

无扩增或扩增效率低

可能的原因建议
与热循环仪模块不配合
材质或结构不佳
  • 确保在PCR / qPCR期间选择用于最佳传热的塑料，例如均匀的薄壁水井。
  • 在快速PCR / qPCR中，建议使用超薄壁和低轮廓塑料，以获得强大的导热性并减少蒸发。
存在抑制剂或核酸酶
过量加样或加样不足
  • 请勿使用超过管或孔的填充体积 ，以实现最佳传热效果。
  • 避免加样不足，防止可影响反应效率的样品蒸发。

qPCR信号弱

可能原因建议
非最佳颜色
封板膜透光性不佳
  • 确保密封膜和帽子光学透明或超清晰以减少荧光信号的失真。

c. qPCR数据不稳定

可能的原因建议
孔的差异性
  • 选择带有白色孔的塑料而不是清晰的孔，因为白色塑料通过防止信号从孔中折射出来有助于提高良好一致性。
封板膜透光性不佳

d. 假阳性结果

可能原因建议
存在DNA污染物
  • 确认塑料和密封件是在严格的指导方针洁净室环境中制造的，以防止DNA污染。
  • 请求制造商提供分析证明书，以证明生产批次已经过测试，证明存在DNA污染物。
  • 如果是在进行人类身份鉴定等敏感的qPCR应用，确保相应的封板膜在生产时经过环氧乙烷处理（ISO18385要求）以去除潜在的DNA污染物。
密封方法不正确

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2.管及板相关问题

a. 与加热模块不完全适配

可能的原因建议
设计不兼容

b. 变形或挤压

可能原因建议
设计不兼容
  • 选择经验证的PCR / qPCR塑料与所用热循环仪兼容，以获得最佳配合。
  • 请咨询制造商提供的塑料选择指南，以便与所使用的热循环仪达到最佳配合。合适情况下，选用裙边板以获得额外的支撑和强度。
  • 为了与机械臂一起使用，选择带有聚碳酸酯（硬壳）框架的裙板以承受由夹具施加的力。
PCR仪热盖施加的高压力

c. 熔化

可能原因建议
次优材料
  • 确保塑料耗材是由聚丙烯制成，从而可以承受热循环。必要时，使用另一生产批号的塑料耗材。如果问题依然存在，请联系生产商。

d. PCR后粘连到加热模块上

可能的原因建议
快速加热和冷却循环

e. 化学浸出

可能原因建议
次优制造过程
  • 可采用由医学级或分子生物学级未循环使用的聚丙烯所制成的PCR/qPCR塑料耗材，以获得批次间的一致性和纯度。
  • 选用依据严格生产要求并具有透明化生产过程的生产商所生产的塑料耗材。

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3.封板膜问题

a. 样品丢失/蒸发

可能原因建议
密封不当薄膜：
  • 沿着每个边缘（包括外边缘）以及井周围和周围紧紧按压薄膜，以适当密封井边。如果可用，请使用密封涂抹器（请参阅工具使用视频）。
  • 如果兼容，选择平台（而不是升高甲板）板以便于密封。对于自动密封，使用刻字（而不是凸起文字）的印版可能有助于确保密封。
管盖：
  • 检查管盖与相应反应管或板的兼容性。
  • 确保管盖放置正确并盖紧。如果可用，请使用封盖工具（有关工具使用，请参阅视频）。

b. 封板膜无粘性

可能的原因建议
不粘纸，压敏胶片

c. 管盖崩开

可能的原因建议
不是很适合
  • 检查管盖与相应管或板的兼容性。
  • 确保管盖放置正确并盖紧。如果有封盖工具，请使用（请参阅工具使用的视频）。
  • 确认正在使用的盖帽（扁平或圆顶）的形状与热循环仪盖子的最佳配合。

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有关更多故障排除提示，请查看PCR 和 qPCR 故障排除指南，访问我们的支持中心或联系我们的技术支持团队。

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仅供科研使用，不可用于诊断目的。