该试剂盒将 SuperScript IV 反转录酶和 Platinum SuperFi 高保真酶相结合，再加上链置换技术，可实现全长 cDNA 扩增，并且得率高、灵敏度和准确性出众，适用于下游 NGS 或 qPCR 分析。
直接反转录试剂盒旨在直接从细胞裂解物中合成 cDNA，而无需提取 RNA。细胞裂解和反转录在同一反应管中进行。合成的第一链 cDNA 可直接用于 PCR 和 qPCR 等下游实验应用。Cells-to-cDNA 试剂盒包括：
SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒旨在直接从哺乳动物细胞裂解物中合成第一链 cDNA，试剂盒中提供用于细胞裂解和反转录的试剂。
该试剂盒中提供含有 SuperScript IV 反转录酶预混合组分。简化的 cDNA 合成流程让您无需提取 RNA。
SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒的优势
- 简化的实验流程，节约时间—单管方案，反应时间较短
- 出色的灵敏度—可从低至单个细胞或 2 pg 总 RNA 中轻松检测低丰度靶标
- 合成高质量 cDNA—获得具有均一覆盖度的全长转录本信息
- 通用性—整体 cDNA 预扩增，与下游 NGS 或 qPCR 分析兼容
实验数据证明，SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒可从低起始量 RNA 或单细胞中获得高得率的 cDNA。低起始量 (2 pg) 通用人类参考 RNA (UHRR) 的 cDNA 得率几乎是 NEBNext™ Single Cell/Low Input cDNA Synthesis and Amplification Module 得率的两倍（图1）。
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图1.SuperScript IV 预扩增试剂盒与 NEBNext™ 预扩增试剂盒的 cDNA 得率比较。与 NEBNext™ Single Cell/Low Input cDNA Synthesis and Amplification Module 相比，SuperScript IV 预扩增试剂盒可提供出色的 cDNA 得率。误差线代表至少五个平行重复实验之间的标准偏差。
与 Smart-seq3 实验方案 V.3 实验流程和 NEBNext™ 试剂盒实验流程相比，SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒实验流程所需的时间明显更短（图2）。
图 2.与同类产品实验流程的比较。SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒与 Smart-seq3 实验方案 V.3 和 NEBNext™ 试剂盒的实验流程和所需时间比较。
实验数据证明，SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒可从低起始量 RNA 或单细胞中获得高得率的 cDNA。低起始量 (2 pg) 通用人类参考 RNA (UHRR) 的 cDNA 得率几乎是 NEBNext™ Single Cell/Low Input cDNA Synthesis and Amplification Module 得率的两倍（图1）。
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图1.SuperScript IV 预扩增试剂盒与 NEBNext™ 预扩增试剂盒的 cDNA 得率比较。与 NEBNext™ Single Cell/Low Input cDNA Synthesis and Amplification Module 相比，SuperScript IV 预扩增试剂盒可提供出色的 cDNA 得率。误差线代表至少五个平行重复实验之间的标准偏差。
与 Smart-seq3 实验方案 V.3 实验流程和 NEBNext™ 试剂盒实验流程相比，SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒实验流程所需的时间明显更短（图2）。
图 2.与同类产品实验流程的比较。SuperScript IV 单细胞/低起始量 cDNA 预扩增试剂盒与 Smart-seq3 实验方案 V.3 和 NEBNext™ 试剂盒的实验流程和所需时间比较。
SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的优势
- 简化实验流程，节约时间—在单个反应管中完成细胞裂解和反转录反应；整个实验流程可节省多达两小时的时间
- 方便—无需 RNA 提取步骤
- qPCR 兼容性—当与新上市的 PowerTrack SYBR Green Master Mix 搭配使用时，性能更出色
- 出色的灵敏度—可在1-10,000个细胞范围内轻松检测低丰度靶标
缩短的实验流程
SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒使用简化的 cDNA 合成流程，无需提取 RNA（图3）。使用该方法，所需的移液步骤更少，这有助于防止 RNA 损失和污染，从而节省时间和精力。
图 3.与传统方法实验流程的比较。相较于传统的 cDNA 合成方法，SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒所用的实验方案可将从细胞到 cDNA 所需的时间缩短一半以上，节省时间的关键步骤与 RNA 分离纯化有关。
出色的灵敏度和得率
SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的性能优于其它厂商的同类试剂盒。在 HeLa S3 细胞研究中，针对不同细胞数量和样本大小，该试剂盒均可进行灵敏检测；对于高丰度 (ACTB)、中等丰度 (PGK1) 和低丰度 (BCL2) 转录本，均能获得更高得率。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 ACTB（高丰度转录本）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 4A 和 4B 显示，与同类试剂盒相比，SuperScript IV CellsDirect试剂盒具有更为出色的灵敏度和得率。
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图4.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 ACTB（高丰度转录本）中合成 cDNA 的结果比较。(A) 使用 SYBR Green Assay 分析 ACTB 的 cDNA 合成：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表一系列不同样本，每个样本含 10 -10,000 个细胞，按照制造商提供的使用说明裂解细胞并合成 cDNA。使用 PowerTrack SYBR Green Master Mix进行 qPCR 分析。(B) 条形图显示了 Ct 值的对比差异（代表得率差异）。与同类产品相比，SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒能稳定提供较高的 cDNA 得率。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 PGK1（中等丰度基因靶标）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 5A 和 5B 显示，对HeLa S3 细胞的一系列 10 不同稀释度样本（10-10,000 个细胞）进行检测时，相比同类试剂盒，SuperScript IV CellsDirect可提供出色的灵敏度和产量。
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图 5.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 PGK1（中等丰度转录本）合成 cDNA 的结果比较。 (A) 使用 TaqMan Assay 分析j检测 PGK1 的 cDNA 合成和扩增曲线：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表不同样本（每个样本含 10 -10,000 个细胞），按照制造商提供的使用说明裂解细胞并合成 cDNA。使用 TaqMan Fast Advanced Master Mix进行分析。(B) 条形图显示针对中等丰度转录本 PGK1 时的灵敏度和得率。SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的性能出众。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 BCL2（低丰度靶标）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 6A 和 6B 显示，对 HeLa S3 细胞的一系列 10 不同稀释度样本（10-10,000 个细胞）进行检测时，相比同类试剂盒，SuperScript IV CellsDirect可提供出色的灵敏度和得率。
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图6.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 BCL2（低丰度转录本）合成 cDNA 的结果比较。(A) 使用 SYBR Green Assay 分析检测 BCL2 的 cDNA 合成：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表不同样本（每个样本含 10 -10,000 个细胞），按照制造商提供的使用说明，裂解细胞并合成 cDNA。使用 PowerTrack SYBR Green Master Mix 进行分析检测。(B)条形图显示针对处理低丰度转录本 BCL2 时的灵敏度和得率。SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的性能出众。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 ACTB（高丰度转录本）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 4A 和 4B 显示，与同类试剂盒相比，SuperScript IV CellsDirect试剂盒具有更为出色的灵敏度和得率。
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图4.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 ACTB（高丰度转录本）中合成 cDNA 的结果比较。(A) 使用 SYBR Green Assay 分析 ACTB 的 cDNA 合成：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表一系列不同样本，每个样本含 10 -10,000 个细胞，按照制造商提供的使用说明裂解细胞并合成 cDNA。使用 PowerTrack SYBR Green Master Mix进行 qPCR 分析。(B) 条形图显示了 Ct 值的对比差异（代表得率差异）。与同类产品相比，SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒能稳定提供较高的 cDNA 得率。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 PGK1（中等丰度基因靶标）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 5A 和 5B 显示，对HeLa S3 细胞的一系列 10 不同稀释度样本（10-10,000 个细胞）进行检测时，相比同类试剂盒，SuperScript IV CellsDirect可提供出色的灵敏度和产量。
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图 5.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 PGK1（中等丰度转录本）合成 cDNA 的结果比较。 (A) 使用 TaqMan Assay 分析j检测 PGK1 的 cDNA 合成和扩增曲线：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表不同样本（每个样本含 10 -10,000 个细胞），按照制造商提供的使用说明裂解细胞并合成 cDNA。使用 TaqMan Fast Advanced Master Mix进行分析。(B) 条形图显示针对中等丰度转录本 PGK1 时的灵敏度和得率。SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的性能出众。
使用 SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒从 BCL2（低丰度靶标）合成 cDNA，使用靶标特异性引物。图 6A 和 6B 显示，对 HeLa S3 细胞的一系列 10 不同稀释度样本（10-10,000 个细胞）进行检测时，相比同类试剂盒，SuperScript IV CellsDirect可提供出色的灵敏度和得率。
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图6.使用不同 cDNA 合成试剂盒，从 BCL2（低丰度转录本）合成 cDNA 的结果比较。(A) 使用 SYBR Green Assay 分析检测 BCL2 的 cDNA 合成：使用一系列不同稀释度的 HeLa S3 细胞代表不同样本（每个样本含 10 -10,000 个细胞），按照制造商提供的使用说明，裂解细胞并合成 cDNA。使用 PowerTrack SYBR Green Master Mix 进行分析检测。(B)条形图显示针对处理低丰度转录本 BCL2 时的灵敏度和得率。SuperScript IV CellsDirect cDNA 合成试剂盒的性能出众。
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