您不必提取RNA来分析基因表达。采用Cells-to-CT™方法，您只需简单地将细胞裂解成裂解液（最少量的操作），然后就可用于下游的RT-PCR，而无需进行RNA纯化。

在本视频中，高级研发经理Richard Fekete博士将就与从直接裂解方法到RNA分析和RT-qPCR相关的典型问题进行简短的解答。

 在定量PCR前，可以直接在48孔、24孔或6孔培养板里直接裂解细胞吗？- 0:32  

可以用冻存的或保存在RNAlater里的细胞吗？-0:24

 


       
 细胞裂解产物可以保存在-80度吗？能保存多长时间？- 0:22  

可以直接裂解未经培养的原代细胞或其它细胞系的细胞吗? - 0:32

 

 

       
 可以自动化操作快速裂解步骤吗？ - 0:27  

可以处理肝素或EDTA抗凝的血标本吗？- 0:27

 

 

 

       

 

 这个试剂能同时提取DNA和RNA吗？ - 0:26  快速裂解法也可以用于裂解组织样品吗？- 0:20
       
 怎么知道我的RT反应系统是不是被一些因子抑制？ - 0:24  怎么用裂解产物分析RNA的质量？ - 0:24
       
 快速裂解法适用于病毒RNA的提取吗？ - 0:19  快速裂解法适用于细菌RNA的提取吗？ - 0:24

       
 

在短视频中回答DNA/RNA分析直接裂解策略问题的是Life Technologies公司研发部的Mu Li, Ph.D Scientist III

 1.在定量PCR前，可以直接在48孔、24孔或6孔培养板里直接裂解细胞吗？  2.可以用冻存的或保存在RNAlater里的细胞吗？
       
 3.细胞裂解产物可以保存在-80度吗？能保存多长时间？  4.可以直接裂解未经培养的原代细胞或其它细胞系的细胞吗？
       
 5.可以自动化操作快速裂解步骤吗？  6.可以处理肝素或EDTA抗凝的血标本吗？
       
 7.这个试剂能同时提取DNA和RNA吗？  8.快速裂解法也可以用于裂解组织样品吗？
       
 9.怎么知道我的RT反应系统是不是被一些因子抑制？  10.直接裂解法对微量的样品是不是一个好的选择？
       
 11.怎么用裂解产物分析RNA的质量？  12.快速裂解法适用于病毒RNA的提取吗？
       
 13.快速裂解法适用于细菌RNA的提取吗？    

 

Ambion Cells-to-CT™常见问题？

  1. 已测试过哪些细胞系？
  2. 是否适用于我的特殊细胞系？
  3. 为什么说这是标准纯化方案的“绿色”替代方案？
  4. 如何去除Cells-to-CT™中的痕量gDNA？

1). 已测试过哪些细胞系？

以下是与Cells-to-CT™系统兼容的细胞系简要清单：

细胞系培养方式种源组织来源
HeLa贴壁培养人源宫颈腺癌
HepG2贴壁培养人源肝癌
Primary Hepatocytes贴壁培养人源肝脏
SK-N-AS贴壁培养人源脑成神经细胞
SK-N-SH贴壁培养人源脑成纤维细胞
U-87 MG贴壁培养人源脑胶质母细胞瘤
ME-180贴壁培养人源宫颈表皮样癌
A549贴壁培养人源肺癌
Jurkat悬浮培养人源急性T细胞白血病
PC-12贴壁培养褐家鼠（鼠）肾上腺嗜铬细胞瘤
PT-K75贴壁培养猪科动物（猪）鼻甲粘膜
NIH/3T3贴壁培养小家鼠（小鼠）胚胎成纤维细胞
Raji悬浮培养人源B淋巴细胞
HEK-293贴壁培养人源肾脏
COS-7贴壁培养绿猴（猴）肾脏
CHO-K1贴壁培养葛利斯鼠（仓鼠）卵巢
NCI-H460贴壁培养人源肺
DU-145贴壁培养人源前列腺
K562悬浮培养人源骨髓
U-2 OS贴壁培养人源骨
Huh-7贴壁培养人源肝脏
Neuro 2A贴壁培养小家鼠脑
BJ贴壁培养人源包皮

2).是否适用于我的特殊细胞系？

Cells-to-CT™系统没有理由不适用于某种细胞系。（请参阅上述已测试确认可兼容的细胞系表）。然而，由于在细胞大小和组成的差异，对于不同的细胞系，每次裂解反应的细胞的最大数量可能略有不同。可使用TaqMan Cells-to-CT™ Control Kit测试抑制效果及最小样品量.

3).  为什么说这是标准纯化方案的“绿色”替代方案？

浪费少，危险低 - 通过10个样品的比较

RNeasy™
35分钟
140 g 塑料垃圾
18 mL有害垃圾		Cells-to-CT™
7分钟
6.6 g 塑料垃圾
0 mL有害垃圾

4).  如何去除Cells-to-CT™中的痕量gDNA？

  1. 确保去除每个孔中的所有培养基.
  2. 除去培养基后，用等体积常温1X PBS冲洗.
  3. 确保所有反应在室温下进行（如果板子在冰上，或加入预冷的裂解溶液，则裂解反应可能不会达到室温，需要迅速移动到实验台）.
  4. 加热裂解溶液至常温，再加入细胞.
  5. 让裂解反应进行8分钟.
  6. 在25°C下进行长达8分钟的裂解反应.