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概述
原代细胞未经永生化处理，因此群体倍增次数有限。每一种细胞类型都拥有不同的最大群体倍增次数，这一参数可在产品指定批次的COA（certificate of analysis）上找到。如需了解“群体倍增”与“传代次数”两个术语之间的比较信息，请参考“入门”页面。
如果您正在使用不含动物源性成份（AOF）的添加剂来培养细胞，请确保使用了包被基质试剂盒。AOF添加剂中不含粘附因子，而包被基质试剂盒能够为细胞提供所需的粘附能力。
可以，由于原代细胞往往是非常敏感的，因此我们强烈建议您在LifeScience-CNTS@thermofisher.com联系我们的分子生物学专家，他们将帮助您选择最合适的转染试剂。
收货后立即将细胞保存于气相液氮中很重要。这些冻存管并不能确保不发生渗漏，将它们浸入液氮的液相中可能会使液氮渗入管中，进而影响细胞活力。
这些是衰老细胞，它们在成体角质形成细胞培养物中很常见。通常情况下培养物中会有一群衰老而不再增殖的细胞。而年轻细胞的个体更小，仍能够继续分裂。当培养物逐渐衰老，您就会观察到越来越多的大细胞，培养物最终也将停止生长。在正确培养和维持的情况下，这些培养物至少能够完成25次的群体倍增生长。
在接种细胞之前，请务必进行一下细胞活力计数，并按照推荐的接种密度进行接种。一些实验方案中提及的培养瓶数量是一个参考指标，您可据此估计每一管冻存细胞大致需要多少个培养容器。管子上的细胞数量是最低保证，，但一般都会多提供一些以确保您能收到我们承诺的细胞数量。也就是说，细胞计数对于保障准确的接种密度是至关重要的，这样您也就可以有效监控细胞生长的群体倍增次数了。
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
不当的复苏操作 不合适的复苏培养基 计数肝细胞时操作过于剧烈 不当的计数操作 细胞在外放置时间过长 | 浏览复苏，种板和计数实验方案 在37°C化冻细胞的时间应小于2分钟 在复苏过程中使用CHRM™培养基来去除冷冻保护剂 缓慢混匀；使用内径较宽的移液枪头 请在计数前确保细胞分散均匀 对4组网格线中的两组进行计数 载入计数板前不要让细胞在台盼蓝混合液中停留超过1分钟 计数后立即接种细胞 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
不当的复苏操作 不合适的复苏培养基 不正确的离心速度 肝细胞计数时操作过剧烈 不当的计数操作 | 浏览复苏，种板和计数实验方案 在37°C化冻细胞的时间应小于2分钟 在复苏过程中使用CHRM培养基来去除冷冻保护剂 按复苏方案检查离心速度和时间是否合适（这些条件随细胞的种属来源而变；通常人源细胞可在室温下以100 x g的转速离心10分钟） 缓慢混匀；使用内径较宽的移液枪头 请在计数前确保细胞混合物分散均匀 对4组网格线中的两组进行计数 载入计数板前不要让细胞在台盼蓝混合液中停留超过1分钟 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
细胞贴附时间不足 基质的品质不佳 此肝细胞批次未经鉴定可用于贴壁培养 | 将您的细胞与特定批次的特征说明表（人源细胞）中的图片进行比较。 使用Gibco™ Geltrex™基质进行包被并观察粘附效果是否增加 使用Gibco™ 胶原I-包被的平板 回顾复苏，种板和计数方案（浏览上述章节来了解更多实验建议） 检查本批次产品的说明书以确保其可用于贴壁培养。 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
接种密度过低 种板过程中肝细胞不够分散 培养板中培养基体积不足 贴壁效率较低（参见之前的章节） 一些批次的动物产品的汇合度在80%以下 | 检查特定批次的特征说明表以获取合适的接种密度（人体细胞）的相关信息 培养前在显微镜下镜检，以确保细胞的接种密度合适 在培养箱中通过8字和前后模式缓慢晃动培养板来均匀分散细胞 请参考文献或咨询技术支持来获得关于培养基体积的建议信息 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
接种密度过高 种板过程中细胞不够分散 孔中培养基体积不足 | 检查特定批次的特征说明表以获取合适的接种密度（人体细胞）的相关信息 培养前在显微镜下镜检，以确保细胞的接种密度合适 在培养箱中通过8字和前后模式缓慢晃动培养板来均匀分散细胞 在加入Geltrex™ Matrix之前振荡平板并润洗单层细胞。 请参考文献或咨询技术支持来获得关于培养基体积的建议信息 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
此肝细胞批次未鉴定可用于贴壁培养 应用了不合适的培养基 细胞培养时间过长 | 检查本批次产品的说明书以确保其可用于贴壁培养。 使用Gibco™William's E培养基和Gibco™种板与培养添加剂套装 请参考我们的培养方案 通常情况下，可种板培养的冻存肝细胞的培养时间不应超过五天 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
这一批次的肝细胞不是 transporter-qualified 的 不合适的培养基 毛细胆管形成时间不足 | 检查本批次产品的规格说明书以确保其是transporter-qualified的 使用Gibco™ William's E培养基与Gibco™ 种板和培养添加剂套装 请参考我们的种板方案 通常情况下，至少需要培养4-5天才能形成毛细胆管网络 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
单层细胞的汇合度不佳（参见上述部分） 单层细胞的完整性不佳（参见上述部分） 不适当的阳性对照 阳性对照的应用浓度错误 | 将实验结果与对应批次的特征说明表（人源细胞）中的展示结果进行比较 请参考我们的酶诱导方案 检查阳性对照以确保其适用性 |
请参见下列原因和相关建议：
可能原因 | 建议 |
测试化合物具有毒性 培养基不合适 此肝细胞批次未鉴定可用于贴壁培养 细胞培养时间过长 | 比较处理细胞与未处理细胞的形态 请参考我们的种板方案 检查本批次产品的规格说明书以确保其可用于贴壁培养。 通常情况下，可贴壁培养的冻存肝细胞的培养时间不应超过五天 |
这一问题可能由两种原因所导致：
- 最可能的原因是由于移除包被试剂和加入细胞之间的间隔时间过长，导致96孔板上包被的基质变干。包被基质一旦变干，就丧失了对细胞的粘附能力。我们推荐用户缩短移除包被试剂与加入细胞之间的间隔时间，最好每次只同时处理几个培养孔。
- 另外，在96孔板中分种细胞耗时较长，管中剩余的细胞可能会聚团。我们推荐您在分种之前再对细胞进行重悬。
这些细胞非常娇弱。我们建议您依照说明书中的操作步骤，并使用合适的培养基。快速化冻是健康培养的关键。这有一些需要考虑的关键项：
- 在使用前，所有的实验材料都使用培养基预先润洗。请勿使用PBS，DPBS或HBSS进行润洗，因为它们不含蛋白。
- 迅速化冻细胞，不要将细胞暴露于空气中。
- 首先将细胞移至预先润洗过的管中，之后缓慢地逐滴加入培养基。不要向细胞一次性加入全量的培养基，这一操作可能引起渗透压休克导致细胞活力降低。
- 使用预热的完全生长培养基，并以正确的细胞密度进行接种。
- 对于某些细胞培养而言，包被基质是必需的。
- 请勿离心原代神经细胞，它们在冻存后的恢复期极为脆弱。
神经干细胞诱导失败有几种可能的诱因：
- 高品质的hPSC细胞对于成功完成神经诱导至关重要。在神经诱导前去除已分化和部分分化的hPSC细胞。
- 在接种用于诱导的hPSC细胞之前，我们推荐用户对细胞进行计数，因为过低或过高的细胞汇合度都将降低诱导效率。诱导实验的推荐接种密度为2–2.5 x 10E4 cells/cm2。
- 应接种细胞团——而非单一细胞悬液——来进行诱导。
- 为了增加诱导效率，可在hPSC分裂期使用10 µM ROCK抑制剂Y27632进行过夜处理，以防止细胞过多死亡。
- 请检查是否在培养细胞的过程中使用了正确的B-27™ 添加剂。
- 通过检查B-27™ 添加剂的有效期来了解该产品是否过期。
- 检查所用含B-27™ 添加剂的培养基是否为新鲜配制。在4°C保存条件下，含添加剂的培养基仅在两周内保持稳定。
- 检查B-27™ 添加剂是否暴露在过热的条件下。化冻后的B-27™ 添加剂不可暴露于室温或更高温度条件下超过30分钟。
- 检查B-27™ 添加剂是否被反复冻融多次。化冻后的B-27™ 添加剂可在4°C条件下放置1周。
- 检查B-27™ 添加剂的外观。本品应为透明的黄色液体。绿色外观意味着添加剂已变质。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.