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細胞治療および遺伝子治療のためのアデノ随伴ウイルス産生
CTS AAV-MAX Helper Free AAV Production System
補完的な研究とcGMPで製造されたAAV-MAXソリューションにより、臨床への道を加速します。研究から臨床および商業生産に至るまでのシームレスな移行を容易にする完全なAAV生産システム。
研究＆開発→前臨床→ 臨床および商業生産
図1.CTS AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemの構成品
RUOとCTS AAV-MAXプロダクションシステムの比較
AAV-MAX Helper-Free AAV Production Systemeは、発見から研究および商業開発の製造に至るまでのスムーズな移行を可能にし、研究グレードおよびcGMP製造の試薬オプションを備えた最適化されたスケーラブルなプラットフォームを提供します。図2は、2種類の血清型を持つCTSシステムとRUOシステムの同等性を示しています。
図2.研究グレード（RUO）とCTS試薬のAAVタイターの比較。AAV血清型AAV2およびAAV6は、125 mLの振とうフラスコで30 mLの生産スケールで製造されました。RUOおよびCTS AAV-MAXシステム試薬の性能は、ウイルスタイターによる測定と同等であることが示されています。力価の測定は定量PCRで行いました。
| 特性 | AAV-MAX (RUO) | CTS AAV-MAX |
|---|---|---|
| 用途 | 研究用にのみ使用できます。 | 細胞、遺伝子、または組織ベースの製品の研究での用途または製造 |
| カタログパックサイズ | 1～10 Lの製造スケール | 1～100 Lの製造スケール |
| 組成 | 同一（培地にはGlutaMAX添加が必要） | 同一（GlutaMAXを含む培地） |
| 性能 | 同じ | 同じ |
| 生産者細胞株 |
|
|
| 規制サポートドキュメント | 不要 |
|
| GMP製造 | ISO 90001またはISO 13485認証済み施設で製造されています | 医療機器、21 CFR Part 820<>12、USP 1043、およびph Eur 5.2のGMPに準拠して製造されています。ISO 13485認証を受けた施設で製造されています |
CTS AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemの構成品
CTSウイルス産生細胞（VPCs）2.0
- クローン性、293F由来、高産生細胞株
- 化学的に定義された培地中の高密度懸濁培養（>12 x 10 6細胞／mL）用に最適化されています
- SV40ラージT抗原または遺伝子工学はありません
- 堅牢な拡張性と経路安定性
- cGMPバンクは、21 CFR 211およびEucraLex、第4巻に準拠して製造され、ICH Q5AおよびICH Q5Dガイドラインに準拠しています
図3. ウイルス産生細胞2.0は、複数の継代にわたって同様の増殖プロファイルを維持します。細胞はViral Production Mediumで培養し、培養生存率およびVCDは播種後4日目から7日目まで測定しました。
中
- CTSウイルス産生培地
- 動物由来成分不含
- 既知組成
- タンパク質不含
- フェノール不含
- 最大100 Lのパックサイズの市販品をご用意しています
- 顆粒状剤形（AGT；Advanced Granulation Technology）フォーマット
- 顆粒乾燥培地フォーマット
- 動物由来成分不含
- 既知組成
- タンパク質不含
- フェノール不含
- 最大100 Lのパックサイズの市販品をご用意しています
- AGT顆粒は急速に溶解し、pHおよび浸透圧に合わせて事前調整されます
図4.CTS Viral Production Mediumは、複数のスケールの細胞培養で栄養補助を追加することなく、7日間、VPC 2.0の高密度で堅牢な増殖をサポートします。VPC2.0は、培養サイズごとに0.5 x 106細胞／mLで培養を開始し、VIセルXRで7日間の増殖を測定しました。使用したすべての振フラスコは、Corning製品である5 L振フラスコを除き、Nalgene（サーモフィッシャーサイエンティフィック）でした。
トランスフェクションおよび製造
- CTS AAV-MAXトランスフェクション試薬およびトランスフェクションブースター（AOF、CD）
- CTS AAV-MAX Enhancer（AOF、CD）
- CTS Viral-Plex™ Complexation Buffer（AOF、CD、タンパク質フリー）
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図5.エンハンサーを添加したものと添加しないもののAAV生産の結果。トランスフェクションの日に、3 x 10 6細胞／mLの調製済みVPC 2.0にEnhancerを添加しました（T=0）。トランスフェクションには、GFP発現転写プラスミドおよびヘルパープラスミドを、それぞれのREP/Capプラスミドとともに使用しました。トランスフェクションから72時間後、AAV-MAX Lysis Bufferを直接培養に添加し、AAVを37℃で2時間回収した後、qPCRによるAAV力価測定を行いました。データはEnhancerによるAAV産生の力価（vg/mL）に合わせてノーマライズしました。
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図6.トランスフェクション中に追加されたブースターの有無に関わらないAAV生産の結果。トランスフェクションには、GFP発現転写プラスミドとヘルパープラスミドをそれぞれのREP/Capプラスミドとともに使用しました。トランスフェクションから72時間後、AAV-MAX Lysis Bufferを直接培養に添加し、AAVを37Cで2時間回収した後、qPCRによるAAV力価測定を行いました。データはブースターによるAAV産生の力価（vg/mL）に合わせてノーマライズしました。
CTSウイルス産生細胞（VPCs）2.0
- クローン性、293F由来、高産生細胞株
- 化学的に定義された培地中の高密度懸濁培養（>12 x 10 6細胞／mL）用に最適化されています
- SV40ラージT抗原または遺伝子工学はありません
- 堅牢な拡張性と経路安定性
- cGMPバンクは、21 CFR 211およびEucraLex、第4巻に準拠して製造され、ICH Q5AおよびICH Q5Dガイドラインに準拠しています
図3. ウイルス産生細胞2.0は、複数の継代にわたって同様の増殖プロファイルを維持します。細胞はViral Production Mediumで培養し、培養生存率およびVCDは播種後4日目から7日目まで測定しました。
中
- CTSウイルス産生培地
- 動物由来成分不含
- 既知組成
- タンパク質不含
- フェノール不含
- 最大100 Lのパックサイズの市販品をご用意しています
- 顆粒状剤形（AGT；Advanced Granulation Technology）フォーマット
- 顆粒乾燥培地フォーマット
- 動物由来成分不含
- 既知組成
- タンパク質不含
- フェノール不含
- 最大100 Lのパックサイズの市販品をご用意しています
- AGT顆粒は急速に溶解し、pHおよび浸透圧に合わせて事前調整されます
図4.CTS Viral Production Mediumは、複数のスケールの細胞培養で栄養補助を追加することなく、7日間、VPC 2.0の高密度で堅牢な増殖をサポートします。VPC2.0は、培養サイズごとに0.5 x 106細胞／mLで培養を開始し、VIセルXRで7日間の増殖を測定しました。使用したすべての振フラスコは、Corning製品である5 L振フラスコを除き、Nalgene（サーモフィッシャーサイエンティフィック）でした。
トランスフェクションおよび製造
- CTS AAV-MAXトランスフェクション試薬およびトランスフェクションブースター（AOF、CD）
- CTS AAV-MAX Enhancer（AOF、CD）
- CTS Viral-Plex™ Complexation Buffer（AOF、CD、タンパク質フリー）
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図5.エンハンサーを添加したものと添加しないもののAAV生産の結果。トランスフェクションの日に、3 x 10 6細胞／mLの調製済みVPC 2.0にEnhancerを添加しました（T=0）。トランスフェクションには、GFP発現転写プラスミドおよびヘルパープラスミドを、それぞれのREP/Capプラスミドとともに使用しました。トランスフェクションから72時間後、AAV-MAX Lysis Bufferを直接培養に添加し、AAVを37℃で2時間回収した後、qPCRによるAAV力価測定を行いました。データはEnhancerによるAAV産生の力価（vg/mL）に合わせてノーマライズしました。
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図6.トランスフェクション中に追加されたブースターの有無に関わらないAAV生産の結果。トランスフェクションには、GFP発現転写プラスミドとヘルパープラスミドをそれぞれのREP/Capプラスミドとともに使用しました。トランスフェクションから72時間後、AAV-MAX Lysis Bufferを直接培養に添加し、AAVを37Cで2時間回収した後、qPCRによるAAV力価測定を行いました。データはブースターによるAAV産生の力価（vg/mL）に合わせてノーマライズしました。
CTS AAV-MAXシステムのスケーリング
既存のAAV産生システムには、力価が低い、cGMPプラスミドDNAのコストが高い、スケーラビリティがない、目的にかなったcGMP製造試薬がないといった課題があります。CTS AAV-MAXシステムはこうした課題を解決し、スケールアップのニーズに合わせ、容積あたりのウイルス力価を維持するスケーラブルな浮遊プラットフォームによって、AAV産生のために開発された製品特異的な規制準拠サポートや試薬を用いて、高力価のAAVを産生することができます。
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図7：AAV6ゲノムタイターは、250 mLの振とうフラスコと50 LのバイオリアクターでAAVを生産できます。完全なCTS AAV-MAXシステムを使用してAAV6を製造しました。原油サンプル中のタイターをddPCRで測定しました。
AAV-MAX産生ワークフロー用の細胞治療システム（CTS）試薬
Gibco Cell Therapy Systems（CTS）試薬は、細胞および遺伝子治療用に設計されたGMP製造製品であるため、自信を持って治療を臨床に移行できます。
| cGMP製造 | 検査および文書 | 実証済みの使用 |
|---|---|---|
| 医療機器、21 CFR Part 820, USP<1043>、およびph Eur 5.2.12のGMPに準拠して製造されています。製造施設は、FDA承認済み、ISO 13485認証済みで、定期的に監査されています。 | トレーサビリティ文書—薬物マスターファイル（DMF）や規制サポートファイル（RSF）、原産地証明書（COO）など。 製品の安全性試験—適用製品の無菌性、エンドトキシン、マイコプラズマなど。 | FDA認可およびEMA認可のCAR T療法およびFDA認可の初の治療用がんワクチンで使用されます。[1] 100件を超える臨床試験で使用されています。 |
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リソース
サポート
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