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ABfinity重组兔单克隆抗体——磷酸化检测的优势

Invitrogen™ ABfinity™ 重组兔单克隆抗体平台尤其适用于制备特异性识别翻译后修饰的抗体,如磷酸化特异性抗体。ABfinity抗体的生产过程利用了兔免疫系统的天然多样性,所得的抗体通常亲和性和特异性会高于小鼠抗体。此外,生物生产过程还可以鉴别出识别靶点磷酸化状态的单一克隆。ABfinity抗体将多克隆抗体的灵敏度与单克隆抗体的特异性相结合。此外,由于ABfinity抗体为重组抗体,无需后续的动物免疫步骤且不会出现克隆漂移,因此具有卓越的批次间一致性。

目录产品包括700多种抗体

目前我们可以提供700多种ABfinity重组兔抗体,其中100多种抗体专为磷酸化状态的特异性识别而研发。除兔单克隆抗体外,我们还提供ABfinity寡克隆抗体,它们是重组多克隆抗体。这些抗体既具备多克隆抗体多样的结合特性,也具备重组抗体卓越的批次间重复性。

严格的样本筛选和功能验证,以确保最终产品质量

所有ABfinity抗体在生产过程中均经过了多轮筛选。这样可以鉴别出在目标应用中具有可靠性能的克隆。最后,我们还尽可能地使用活性靶点检测抗体,以验证该抗体针对特定磷酸化状态的特异性。

ABfinity磷酸化特异性抗体采用的生产方法、过程样本筛选以及进一步的功能验证,使其成为高度特异、高度灵敏的检测工具,可用于细胞内主要磷酸化事件的检测。

Performance characteristics of Phospho–4E-BP1 (Thr46) antibody

磷酸化–4E-BP1 (Thr46) 抗体的性能特性。取下列样本的细胞裂解物蛋白质各30 μg,进行4E-BP1 [pT46]的蛋白质免疫印迹分析:泳道1,HEK 293;泳道2,使用100 nmol/mL EGF处理10分钟的HEK 293;泳道3,MCF7;泳道4,使用150 μg/mL胰岛素处理15分钟的MCF7。使用Invitrogen NuPAGE 4–12% Bis-Tris凝胶XCell SureLock电泳系统Sharp预染蛋白质分子量标准品iBlot干式转印系统进行蛋白质电泳和免疫印迹步骤。将蛋白质转印至硝酸纤维素膜上,使用5%的脱脂牛奶室温封闭1小时。使用1–2 μg/mL的ABfinity 4E-BP1 [pT46] 重组兔寡克隆抗体及2.5%的脱脂牛奶,在摇床上4°C过夜,检测约20 kDa的4E-BP1 [pT46]。采用1:5,000稀释的山羊抗兔IgG HRP二抗,并使用Novex ECL化学发光底物试剂盒进行化学发光检测。

 

进一步了解ABfinity抗体


磷酸化特异性流式细胞仪抗体功能验证

我们的各种磷酸化特异性的流式细胞仪抗体和相关缓冲液系统已经过多种功能验证。我们的目标是使研究者确信使用我们的抗体能在所有的 流式细胞实验中达到预期效果。

功能验证包括:

  • 通路特异性测试——确认哪些细胞诱导了不同的通路。磷酸化特异性染色仅在通路被激活的细胞中可见。
  • 细胞类型特异性测试——确认磷酸化特异性染色仅在表达目的蛋白的细胞类型中可见。
  • 应用间测试——可包括蛋白质免疫印迹、ELISA和免疫化学,有助于确保抗体性能符合预期。
  • 缓冲液兼容性测试——在3种不同的缓冲液体系中测试各种磷酸化特异性抗体,确认最效果最好的缓冲液。
  • 交叉反应性测试——在人和小鼠细胞中测试各种磷酸化特异性抗体,确定种属交叉反应性。
  • 竞争力——将我们的抗体与竞争产品相比较,确保我们的产品拥有相当或更佳的性能。

磷酸化流式细胞仪抗体功能验证的代表性数据

Representative Phospho flow cytometry antibody functional testing data

 

使用eBioscience及同类克隆产品进行通路特异性测试。按标示刺激U937细胞,使用抗磷酸化STAT 6抗体 (APC) 进行细胞内染色。红色光谱为未处理细胞,蓝色光谱为已经过处理的细胞。

如需了解更多信息,请参见磷酸化流式细胞仪抗体验证


国际抗体验证工作组建提出抗体特异性验证指南

国际抗体验证工作组 (IWGAV) 发布了一组指南,用于抗体的特异性验证:

A proposal for validation of antibodies, Mathias Uhlen, Anita Bandrowski, Steven Carr, Aled Edwards, Jan Ellenberg, Emma Lundberg, David L Rimm, Henry Rodriguez, Tara Hiltke, Michael Snyder & Tadashi Yamamoto, Nature Methods (2016) doi:10.1038/nmeth.3995.

通常,应用检测会展示抗体在特定应用中的作用,而功能性测试与之不同,它表明了抗体确实可与目标靶点真正结合。

该论文介绍了几种“支柱策略”,每种策略都是一项验证抗体与目标靶点结合的技术。其中,免疫沉淀–质谱分析策略 (IP-MS) 是一种独特的检测技术,其结果展示了与免疫沉淀所捕获的蛋白特异性结合的真实肽段序列(点击此处,查看IP-MS文章)。基因修饰是通过基因敲除和基因敲低技术,降低特定基因的数量,以去除特定的蛋白质,从而验证其特异性。多表位方法通过使抗体靶向相同靶点的不同表位,证明两种抗体的特异性。

IWGAV是全球范围内由研究方向各异的蛋白质生物学家组成的独立工作组。它是首家为抗体生产商和使用者制定抗体验证策略的组织。作为世界领先的科技服务供应商,Thermo Fisher Scientific在2015年为IWGAV提供经济支持,从而引领行业标准的开发,并帮助科研人员克服抗体特异性和重复性带来的共同挑战。

进一步了解IP-MS基因敲除/基因敲低功能验证。

遵循IWGAV指南进行Invitrogen抗体功能验证

抗体是科学研究中创新和发现的关键,但使用性能不明确的试剂会对生物医学科学的严谨性和可重复性产生负面影响。国际抗体验证工作组通过发表抗体功能验证指南解决这个问题。Thermo Fisher Scientific遵循该指南,根据新提出的抗体功能验证支柱策略概念,检测Invitrogen抗体的特异性,并针对我们的抗体提供了全面的应用功能验证数据,力争重新定义抗体的性能标准。我们还根据蛋白靶点不同,在生物处理、表位定位和抗体测序以外,通过IP-MS分析、CRISPR和siRNA检测抗体,并在多个平台上进行了全面的应用功能验证。在我们的产品页面上,您将会看到关于靶点特异性和应用的更全面数据,使您对Invitrogen抗体在目标实验应用中的表现充满信心。

查看经过全面功能验证的抗体示例

如需搜索Invitrogen抗体,请浏览thermofisher.com/antibodies

新产品发布

Super Bright聚合物染料——适用于紫色激光的超亮染料

Invitrogen eBioscience Super Bright染料是基于聚合物串联的超亮荧光染料系列,采用紫色激光激发 (405 nm)。所有Super Bright染料均以其发射波长命名。这些染料适用于流式细胞仪,其亮度可以提升信号微弱的细胞群体的分辨率。与其他同类试剂相比,该染料溢漏至其他紫色通道或与其他聚合物染料的非特异性作用均较低。

Super Bright可与其他常用的荧光分子、甲醛和甲醇固定剂以及Invitrogen eBioscience UltraComp eBeads微球完全兼容,优化流式细胞仪多色抗体组合。

Super Bright染料包括:

  • Super Bright 436——最大激发光波长为414 nm,发射峰为436 nm。该染料的亮度高于相同通道中使用的非聚合物染料,它具有与Brilliant Violet 421相当的阳性和阴性细胞群体分辨率,是Brilliant Violet 421的替代产品。
  • Super Bright 600——由Super Bright 436和发射光波长为600 nm的受体染料组成的串联染料。该串联聚合物染料的亮度与Brilliant Violet 605相当。

增加了您的多色流式选项

Super Bright染料可与传统的荧光基团一样用于流式细胞仪应用。但是,如果在同一块检测板中使用两种或多种Super Bright结合抗体,则建议使用Super Bright染色缓冲液,以最大程度地减少这些聚合物染料之间的非特异性作用。Super Bright染色缓冲液的用量为5ul/测试,使用方便。

Super Bright染料增加了您的多色流式选项,拓宽了紫色激光的应用范围。Super Bright抗体是您期待已久的新产品。

进一步了解Super Bright染料


Alexa Fluor Plus二抗——提高您珍贵样本的信噪比

当进行细胞成像和基于荧光的蛋白质免疫印迹时,您不会在关键的实验中冒险处理富有挑战性的样本。现在,我们针对您一直所信赖的、具有出色的亮度和光稳定性的Invitrogen Alexa Fluor二抗推出了进阶版产品,全新Alexa Fluor Plus采用独有配方,通过专利的“加强型”染料化学技术研发。这种独特的配方加上高预吸附处理,使得Alexa Fluor Plus二抗具有增强的信噪比和出色的亮度。

结果比较:

The Invitrogen Alexa Fluor Plus 488 secondary antibody helps you see greater detail and shows a higher signal-to-noise ratio

Invitrogen Alexa Fluor Plus 488二抗有助于展现更多的细节,提高信噪比。标记物比较:(A) Alexa Fluor 488二抗与 (B) 全新Alexa Fluor Plus 488二抗。

进一步了解Alexa Fluor Plus二抗

资源和指南

抗体在线学习中心

thermofisher.com上线新资源!全新抗体在线学习中心包含了各种技术材料,旨在为研究人员和技术人员提供开发、选择和使用抗体所需的相关技术背景知识,推进研究进程。

全新的资源中心提供了各种宝贵的技术信息,包括细胞信号通路、抗体方法、应用指南及相关的资源库。

新闻和观点

eBioscience is now part of Thermo Fisher Scientific

eBioscience现已加入Thermo Fisher Scientific

2016年4月,Thermo Fisher Scientific收购了Affymetrix,eBioscience成为Thermo Fisher Scientific的一部分。现在,随着网络整合的完成,eBioscience试剂已在thermofisher.com 上线,我们可提供全方位且创新的抗体、荧光染料和多色流式细胞仪试剂产品系列,适用于免疫学、肿瘤学、细胞生物学和干细胞生物学研究。

除多色流式细胞试剂外,整合后的eBioscience和Invitrogen产品系列还可提供各种试剂,用于细胞因子、生长因子及其他可溶性蛋白的分析。我们可提供基于微珠的多重免疫分析产品、即用型ELISA试剂盒、匹配的抗体对、蛋白质和标准品,为生物学系统分析带来全方位的解决方案。

请登录thermofisher.com/ebioscience,了解各种细胞分析解决方案。

不可转售。Super Bright聚合物染料由Becton, Dickinson and Company授权销售。