每个免疫标记实验都面临着各自的挑战。从一抗结合到荧光染料标记的最终检测，以及期间的每个漂洗步骤，我们都为您提供优化方案，提高您实验的灵敏度和特异性。直接标记一抗具备两个关键优势：
我们提供一系列抗体标记试剂盒。根据您的应用选择对应的试剂盒。以下选择指南可帮助您查找最适用的试剂盒。
您需要哪种抗体标记试剂盒？
这些抗体标记试剂盒可提供快速工作流程，操作时间最短。
| Zip 快速抗体标记试剂盒 | Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 否 |
| 特异位点标记？ | 否 | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 否 |
| 方案所需时间 | 15分钟 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
这些抗体标记试剂盒使用标准共价胺反应性染料，随机标记抗体上的赖氨酸。
| 抗体标记试剂盒 | Zip 快速抗体标记试剂盒 | 蛋白标记试剂盒 | ||
|---|---|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 100 µg | 1 mg | |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | |||
| 是否可以检测标记的效果？ | 是 | 否 | 是 | |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 是 | 是 | |
| 特异位点标记？ | 否 | 否 | 否 | |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 否 | 否 | |
| 标记后是否需要纯化？ | 是 | 否 | 是 | |
| 方案所需时间 | 90 分钟 | 15分钟 | 90 分钟 | |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA | |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||||
这些抗体标记试剂盒可以在一个反应中标记低至1µg的抗体，同时结合物的损失最小。
| Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 否 |
| 特异位点标记？ | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 |
| 方案所需时间 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | |
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | |
这些抗体标记试剂盒采用的标记方法不会对抗原结合位点进行标记。
| Zenon 抗体标记试剂盒 | SiteClick 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 1-20 µg | 100 µg 至 5 mg |
| 标记靶点/方法 | Fc片段/抗体亲和力 | IgG重链上的糖链/共价反应，无铜催化的链接化学 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 是 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 否 | 是 |
| 特异位点标记？ | 是 | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 是 | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 是 |
| 方案所需时间 | 10 分钟 | 过夜孵育 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
这些抗体标记试剂盒具有操作简单的流程方案，无需丰富实操经验也可轻松上手。
| Zip 快速抗体标记试剂盒 | Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 是 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 否 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 否 |
| 方案所需时间 | 15分钟 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
这些抗体标记试剂盒可提供快速工作流程，操作时间最短。
| Zip 快速抗体标记试剂盒 | Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 否 |
| 特异位点标记？ | 否 | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 否 |
| 方案所需时间 | 15分钟 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
这些抗体标记试剂盒使用标准共价胺反应性染料，随机标记抗体上的赖氨酸。
| 抗体标记试剂盒 | Zip 快速抗体标记试剂盒 | 蛋白标记试剂盒 | ||
|---|---|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 100 µg | 1 mg | |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | |||
| 是否可以检测标记的效果？ | 是 | 否 | 是 | |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 是 | 是 | |
| 特异位点标记？ | 否 | 否 | 否 | |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 否 | 否 | |
| 标记后是否需要纯化？ | 是 | 否 | 是 | |
| 方案所需时间 | 90 分钟 | 15分钟 | 90 分钟 | |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA | |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||||
这些抗体标记试剂盒可以在一个反应中标记低至1µg的抗体，同时结合物的损失最小。
| Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 否 |
| 特异位点标记？ | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 |
| 方案所需时间 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | |
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | |
这些抗体标记试剂盒采用的标记方法不会对抗原结合位点进行标记。
| Zenon 抗体标记试剂盒 | SiteClick 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 1-20 µg | 100 µg 至 5 mg |
| 标记靶点/方法 | Fc片段/抗体亲和力 | IgG重链上的糖链/共价反应，无铜催化的链接化学 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 是 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 否 | 是 |
| 特异位点标记？ | 是 | 是 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 是 | 是 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 是 |
| 方案所需时间 | 10 分钟 | 过夜孵育 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
这些抗体标记试剂盒具有操作简单的流程方案，无需丰富实操经验也可轻松上手。
| Zip 快速抗体标记试剂盒 | Zenon 抗体标记试剂盒 | |
|---|---|---|
| 每个反应能够标记IgG的量* | 100 µg | 1-20 µg |
| 标记靶点/方法 | 游离赖氨酸/共价胺反应性化学标记 | Fc片段/抗体亲和力 |
| 是否与BSA或样品缓冲液中的其他稳定剂兼容？ | 否 | 是 |
| 是否可以检测标记的效果？ | 否 | 否 |
| 偶联物是否能储存24小时以上？ | 是 | 否 |
| 标记后是否需要纯化？ | 否 | 否 |
| 方案所需时间 | 15分钟 | 10 分钟 |
| 最佳应用** | FC、IF、WB、HCA | FC、IF、WB、HCA |
| *除非另有说明，试剂盒基于分子量为150 kDa的完整IgG蛋白进行优化。对于这类试剂盒，请参考“如何调节蛋白浓度，以获得染料和蛋白的最佳比例”的说明文件。 | ||
| * * FC=流式细胞术；IF=免疫荧光；WB=蛋白印迹分析；HCA=高内涵分析 | ||
如果无需抗体标记试剂盒，是否需要其他染料？
选择 Dylight抗体标记试剂盒，用Dylight荧光染料标记1mg或100μg抗体。
查找单独的胺反应性染料和更多关于胺反应性化学标记的信息荧光基团及其胺反应衍生物 — Molecular Probes 技术手册，第1章
我们也有单独的巯基活性染料试剂，您可以查看巯基反应探针 — Molecular Probes 技术手册，第2章。
共价抗体标记试剂盒
Zip 快速抗体标记试剂盒
Zip Alexa Fluor 快速抗体标记试剂盒利用荧光染料有效标记您的珍贵抗体，能够在 15 分钟内获取可直接使用的抗体偶联物。
- 标记100μg的IgG抗体
- 每个试剂盒可进行三次标记反应
- 非常快速且易于使用
- 抗体回收率100%-无纯化步骤
- 无需化学或偶联经验
试剂盒足够进行三次独立的标记反应。标记产物适合多种下游应用，包括流式细胞术、荧光显微镜、免疫组织化学、一抗检测、ELISA、免疫细胞化学和间接FISH。只需向含有Zip缓冲液的成分A中加入1mL的水，再加入1mg的抗体，孵育15分钟，您的抗体就完成标记可以使用了（图1）。
图 1.Zip快速抗体标记试剂盒概览。
Zip快速抗体标记试剂盒选择指南
Ex/Em=荧光激发和发射波长最大值，单位为nm。
更多关于Alexa Fluor染料和其他荧光染料的信息，请参见荧光染料选择指南
抗体标记试剂盒抗体标记试剂盒
赛默飞抗体标记试剂盒是基于性能卓越的Alexa Fluor、Pacific Blue或Pacific Orange染料，标记100µg IgG多克隆或单克隆抗体。
- 标记100µg
- 每个试剂盒能够进行五次标记反应
- 90分钟内完成抗体标记
- 大约15分钟的手动操作时间
- 需要在标记反应之前除去BSA和其他蛋白稳定剂
抗体标记试剂盒利用可与氨基反应的Alexa Fluor、Pacific Blue或者Pacific Orange荧光基团，将它共价结合到您的目的IgG抗体上。荧光基团和蛋白之间的共价键非常稳定，而且您所用的荧光基团物与Invitrogen提供的一抗、二级的荧光基团是相同。
这些试剂盒针适用于每次反应标记100µg的抗体。仅需用所提供的缓冲液将蛋白浓度调整到1mg/mL左右，然后将其加到一瓶胺反应性染料中。所有稳定蛋白（如BSA）必须在标记反应前去除。
在分离柱实现对≥40 kDa蛋白的分离（图3）。 整个标记与纯化过程仅需90分钟即可完成，一个试剂盒包含完成五次偶联所需的全部试剂。
图 3.抗体标记试剂盒流程概述。仅需用所提供的缓冲液将蛋白浓度调整到1mg/mL左右，然后将其加到一瓶胺反应性染料中。在分离柱实现对≥40 kDa蛋白的分离。
抗体标记试剂盒选择指南
| 标签 | Ex/Em | 货号 |
|---|---|---|
| Alexa Fluor 350 | 346/442 | A20180 |
| Alexa Fluor 488 | 495/519 | A20181 |
| Alexa Fluor 532 | 532/553 | A20182 |
| Alexa Fluor 546 | 556/573 | A20183 |
| Alexa Fluor 555 | 555/565 | A20187 |
| Alexa Fluor 568 | 578/603 | A20184 |
| Alexa Fluor 594 | 590/617 | A20185 |
| Alexa Fluor 647 | 650/665 | A20186 |
| Alexa Fluor 680 | 684/707 | A20188 |
| Alexa Fluor 790 | 784/814 | A20189 |
| Pacific Blue 染料 | 410/455 | P30013 |
| Pacific Orange染料 | 405/551 | P30014 |
Ex/Em=荧光激发和发射波长最大值，单位为nm。
更多关于Alexa Fluor染料和其他荧光染料的信息，请参见荧光染料选择指南
蛋白标记试剂盒
赛默飞蛋白标记试剂盒提供了一种简便的方法，用荧光染料（包括Alexa Fluor染料）或生物素共价标记1mg IgG抗体。
- 标记1mg抗体
- 每个试剂盒能够进行三次标记反应
- 标记前需要去除BSA和其他稳定剂
- 与含胺基的缓冲液不兼容（如Tris）
- 2小时后即可使用抗体
- 大约30分钟的手动时间
蛋白标记试剂盒采用了胺反应性的荧光基团或半抗原，使其与IgG抗体共价连接。荧光基团和蛋白之间的共价键非常稳定，而且这种标记方法与我们制备Invitrogen一抗和二抗的方法是相同的。
只需将约1mg纯化的IgG（溶于约500μL不含胺基的缓冲液，如Tris中）加入含有已知量的胺反应性染料和一个磁力搅拌棒的小瓶中。使用预填充的纯化柱完成纯化，有较高的抗体回收率（一般>85%）。整个标记和纯化过程可以在90min内完成（手动时间约15min）。游离染料的去除对于标记程度(DOL)的测定至关重要。试剂盒能满足3次偶联反应。
图 4.蛋白标记试剂盒流程概述。将蛋白浓度调节至约2mg/mL，加入碳酸氢盐，然后将溶液加入到活性染料小瓶中。使用预填充的纯化柱完成对≥20 kDa.蛋白的纯化。
蛋白标记试剂盒选择指南
| 标签 | Ex/Em | 货号 |
|---|---|---|
| Alexa Fluor 350 | 346/442 | A10170 |
| Alexa Fluor 488 | 495/519 | A10235 |
| Alexa Fluor 532 | 532/553 | A10236 |
| Alexa Fluor 546 | 556/573 | A10237 |
| Alexa Fluor 555 | 555/565 | A10274 |
| Alexa Fluor 568 | 578/603 | A10238 |
| Alexa Fluor 594 | 590/617 | A10239 |
| Alexa Fluor 633 | 621/639 | A20170 |
| Alexa Fluor 647 | 650/665 | A20173 |
| Alexa Fluor 660 | 663/690 | A20171 |
| Alexa Fluor 680 | 679/702 | A20172 |
| 荧光素 | 494/518 | F10240 |
| Oregon Green 488 | 496/524 | O10241 |
| Pacific Blue 染料 | 410/455 | P30012 |
| Pacific Orange 染料 | 400/551 | P30016 |
| Texas Red 染料 | 595/615 | T10244 |
| 生物素 | 不适用 | D20655 |
Ex/Em=荧光激发和发射波长最大值，单位为nm。
更多关于Alexa Fluor染料和其他荧光染料的信息，请参见荧光染料选择指南
位点特异性抗体标记试剂盒
使用Zenon抗体标记试剂盒进行亲和标记
Invitrogen Zenon标记技术为制备荧光标记抗体提供了一种快速且可靠的实验方法，此标记方法适用于多种荧光染料，即使是微量、未纯化（如杂交瘤细胞的培养上清液）的抗体也可进行标记。 经过特殊设计的Zenon片段只结合抗体的Fc片段，这种快速、非共价结合方法能够迅速标记微量抗体。Zenon标记技术得到的标记抗体适用于所有可使用直标抗体的应用领域。Zenon 标记技术的优势包括:
- 标记时间仅为10分钟
- 一次标记1–20µg的一抗
- 与BSA及其它蛋白稳定剂相兼容
- 无需纯化步骤
- 可与其他小鼠单克隆抗体同时使用
Zenon标记技术为标记人IgG，小鼠IgG1、IgG2a和IgG2b抗体以及兔IgG抗体提供了一种通用且操作简单的方法。经过特殊设计的Invitrogen Zenon片段只结合抗体的Fc片段，这种快速、非共价结合方法能够迅速标记微量抗体（图5）。Zenon标记技术简便、高效，标记过程仅需10分钟。
Zenon-抗体复合物形成后，需要加入非特异性IgG来封闭所有未结合的Zenon片段，后续则无需再进行柱纯化。Zenon复合物则可直接加到样品中。
使用Zenon标记技术标记的抗体与市售直标抗体具有相近的荧光强度或酶活性（图6）。
图5.Zenon标记技术的工作原理。使用Zenon抗体标记的非共价标记（上部）与使用APEX、抗体、蛋白、Zip Rapid和SAIVI标记试剂盒的共价标记（底部）。
图6.Zenon标记技术制备的抗体与市售直接共价标记的抗体的荧光亮度相当或较之更强。各种淋巴细胞标记物抗体分别与别藻蓝蛋白（APC）共价结合或者1μg的Zenon APC复合物非共价结合。然后，标记的抗体用于人外周血淋巴细胞样品的染色。增加Zenon标记技术所需试剂与一抗的比例，可进一步增强Zenon标记抗体的荧光亮度。
Zenon抗体标记试剂盒选择指南
| 反应性 | 靶标亚型 | 查找产品 |
|---|---|---|
| 小鼠 | IgG1 | Zenon™ 小鼠 IgG1 标记试剂盒 |
| IgG2a | Zenon™ 小鼠 IgG2a 标记试剂盒 | |
| IgG2b | Zenon™ 小鼠 IgG2b 标记试剂盒 | |
| 人 | IgG | Zenon™ 人 IgG 标记试剂盒 |
| 兔 | IgG | Zenon™ 兔 IgG 标记试剂盒 |
| 山羊 | IgG | Zenon™ 山羊 IgG 标记试剂盒 |
使用SiteClick抗体标记试剂盒的点击化学标记
赛默飞SiteClick标记试剂盒提供简单且温和的方法，使结合物位点选择性地结合到重链的N-聚糖上，远离抗原结合域，不同标记实验间和抗体间的重复性好，稳定性高。一系列结合物可选择性地附着在重链聚糖上，包括藻胆蛋白（如R-PE）、QDot探针、Alexa Fluor染料、pHrodo染料、金属螯合物和其他小分子如生物素，可实现使用同一物种来源的抗体进行多重分析。其特性包括：
- 标记100μg至5mg的抗体
- 易于遵循逐步方案
- 高效、位点特异性、可重复的标记化学
- 试剂盒和染料以灵活的规格提供，便于设计多色实验
一般来说，IgG抗体包含两个N-聚糖，它们连接到位于抗体重链Fc结构域的特异性保守天冬酰胺残基上。这些糖链主要是具有两个末端分支的复杂双链聚糖，它们在结构上非常相似，且末端序列高度一致。大多数抗体聚糖分支末端为半乳糖-N-乙酰氨基葡萄糖(Gal-GlcNAc-)或N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc-)。用β-半乳糖苷酶去除末端的Gal残基，为随后的酶促β-半乳糖基转移酶（GalT）反应暴露末端GlcNAc标记位点（图7）。在Gal残基被β-半乳糖苷酶切割后，对于一条重链，每个N-聚糖平均含有2个末端GlcNAc残基（每个抗体含有4个末端GlcNAc）。叠氮化物激活的抗体现在可以用二苯并环辛炔（DIBO）功能化的探针通过无铜催化的链接化学进行标记（图8）。
如何使用SiteClick技术对抗体进行位点特异性标记
该视频解释了如何使用酶反应和点击化学方法轻松进行位点特异性抗体标记。这种方法可以应用于所有完整的IgG抗体，不需要抗体工程或复杂的方法。
图 7.SiteClick抗体标记试剂盒概述。(A) SiteClick抗体标记过程的第一步包括使用β-半乳糖苷酶把抗体的重链N-聚糖去除末端半乳糖残基，暴露出的可修饰GlcNAc残基。第二，通过使用GalT(Y289L)酶将GalNAz连接到末端GlcNAc残基，游离末端GlcNAc残基被叠氮化物标记激活。(B)在第三步中，叠氮化物残基与所选择的二苯并环辛基（DIBO）功能化探针（例如Alexa Fluor 488 sDIBO炔烃）反应（该反应见图9）。平均标记比例是每个抗体带有3-3.5个标记物。
图 8.无铜催化的点击化学：叠氮化物/DIBO反应。叠氮化物和炔烃部分可以互换。可以用DIBO对分子标记，然后和荧光基团或半抗原-叠氮化物进行反应。
SiteClick方法与许多物种的抗体兼容，包括但不限于人、兔、小鼠、大鼠、羊、仓鼠和鸡。此外，SiteClick标记对几种抗体类别（如IgG、IgM和IgY）都有效，需要注意的是，鸡IgY抗体有6个重链聚糖，而不是2个，因此可以标记到更高的水平。
SiteClick抗体标记系统具有灵活性
SiteClick抗体标记系统提供两种试剂盒选择：
- 包含用于制备抗体的叠氮化物修饰成分和标记抗体的sDIBO炔烃的试剂盒（图7A和图7B为完全反应）。
- 仅包含叠氮化物修饰成分的试剂盒（图7A为反应的前2步）。
- 用于标记预修饰抗体的各种sDIBO炔烃试剂也可单独选购（图7B中的步骤）。
这种规格的灵活性具有几个优点，包括能够轻松地改变所用的荧光染料，而不影响相同抗体的标记程度，以及能够制备大量预修饰的抗体，并在需要时只标记少量，再次保持标记程度和功能的稳定性。
高度保留抗体功能
与随机标记的胺反应性染料相比，染料与抗体重链Fc结构域的n -链聚糖的共价和位点特异性结合确保了抗原结合位点的免疫原性，从而更有效地结合抗原。在SiteClick标记和胺反应性标记的抗肌钙蛋白I抗体的对比中，SiteClick标记抗体的灵敏度大于胺反应性标记抗体的灵敏度（图9）。
图 9.微球夹心法中SiteClick抗体标记与胺反应性抗体标记的比较。采用抗肌钙蛋白(Trpl)抗体捕获微珠，使用SiteClick系统或胺反应系统标记的生物素化抗Trpl抗体检测肌钙蛋白抗原。使用链霉亲和素介导的化学发光试验对结果进行检测。
抗体标记程度的批次间一致性
用SiteClick抗体标记系统标记抗体可为您提供可靠数据，即抗体每次都会以相同的方式标记，无需进行反应优化。这意味着每个分子上连接了相同数量的染料，抗原结合位点同样暴露，每次都提供相同的结果。不同抗体之间标记的一致性示例图10。
图 10.批次间和抗体间的一致性。不同用户在三年时间内，在完全相同的条件下，对来自不同物种的28种不同的一抗使用β-半乳糖苷酶消化的叠氮活化抗体和SiteClick Alexa Fluor 488 sDIBO炔烃染料进行标记。 标记的平均程度为3.4+/- 0.39，证明了SiteClick 标记系统的一致性。这些抗体的类型、物种和抗原性参见表1。
表 1。标记后一抗的抗原性（图11）。
| 人IgG1 | 人IgG3 | 小鼠IgG1 | 小鼠IgG2a | 羊多克隆 |
|---|---|---|---|---|
| EGFR | 淋巴瘤细胞 | GD2 | CD4 | 载脂蛋白-A2 |
| HER2/neu | GD3 | β-tubulin | CD3 | |
| sLea | sLea | CD8a | CD8 | |
| GD2 | f-GM1 | CD45 | CD56 | |
| GM2 | Tn | C3b、iC3b | C3b、iC3b、C3dg | |
| J591 | 干扰素γ |
SiteClick抗体标记试剂盒的选择指南
| 产品名称 | 标记的抗体量 | Ex/Em（激发/发射波长）* | 货号 |
|---|---|---|---|
| 仅适用于抗体修饰的试剂盒 | |||
| SiteClick叠氮基修饰试剂盒 | 100 μg | 不适用 | S20026 |
| 1 mg | S10900 | ||
| 5 mg | S10901 | ||
| 单独的标记试剂 | |||
| SiteClick Alexa Fluor 488 sDIBO炔烃 | 100 μg | 495/519 | C20027 |
| 1 mg | S10904 | ||
| 5 mg | S10909 | ||
| Site Click Alexa Fluor 555 sDIBO炔烃 | 100 μg | 555/565 | C20028 |
| 1 mg | S10905 | ||
| 5 mg | S10910 | ||
| SiteClick Alexa Fluor 647 sDIBO炔烃 | 100 μg | 650/665 | C20029 |
| 1 mg | S10906 | ||
| 5 mg | S10911 | ||
| SiteClick iFL pHrodo Red sDIBO炔烃 | 100 μg | 560/585 | C20034 |
| 1 mg | S10903 | ||
| 5 mg | S10908 | ||
| SiteClick Biotin sDIBO炔烃 | 100 μg | 不适用 | C20030 |
| 1 mg | S10902 | ||
| 5 mg | S10907 | ||
| SiteClick Amine sDIBO炔烃 | 100 μg | 不适用 | C20031 |
| SiteClick SDP Ester sDIBO炔烃 | 100 μg | 不适用 | C20032 |
| 含抗体修饰和标记试剂的试剂盒 | |||
| SiteClick R-PE抗体标记试剂盒 | 100 μg | 565/578 | S10467 |
| SiteClick Qdot 525抗体标记盒 | 100 μg | 405/525 | S10449 |
| SiteClick Qdot 565抗体标记盒 | 100 μg | 405/565 | S10450 |
| SiteClick Qdot 585抗体标记盒 | 100 μg | 405/585 | S10451 |
| SiteClick Qdot 605抗体标记盒 | 100 μg | 405/605 | S10469 |
| SiteClick Qdot 625抗体标记盒 | 100 μg | 405/625 | S10452 |
| SiteClick Qdot 655抗体标记盒 | 100 μg | 405/655 | S10453 |
| SiteClick Qdot 705抗体标记盒 | 100 μg | 405/705 | S10454 |
| SiteClick Qdot 800抗体标记盒 | 100 μg | 405/800 | S10455 |
*Ex/Em=荧光激发和发射波长最大值，单位为nm。
更多关于Alexa Fluor染料和其他荧光染料的信息，请参见荧光染料选择指南