“总体来说,它的性能优于其他流式细胞仪,利用声波聚焦专利技术,每秒可分析35000个细胞。即使以100-1000μL/ min的高流速进行检测,数据的准确度也不会降低,这大大缩短了实验所需的时间。”
Takashi Satoh博士,日本大阪大学IFReC助理教授
在考虑购买流式细胞仪时,请教其他研究人员的经验并听取他们对仪器操作经验的直接反馈有助于您选择合适的仪器,特别是当您与使用相似的样品类型、通量或应用的实验室人员交流时可能会帮助更大。许多研究人员愿意分享他们的仪器决策理由;在实验室中安装并运行后,他们的实验应用以及对流式细胞仪的评价。
精确度
“过去四年来,我们与赛默飞世尔科技都合作得非常愉快。我们的合作可以追溯到三年半之前,我们从最初的、偶然/意外的研究发现发展到现在我们的科研技术已被海外的国际知名参考实验室广泛采纳。这对于地理位置较偏远的澳洲西部的团队来说,是非同寻常的。至少对于我们来说,这种合作是非同寻常的,而且也卓有成效。”
Tim Inglis,医学士、医学博士、哲学博士、英国皇家病理科医学院院士、澳洲皇家内科医学院荣誉院士、热带医学和卫生学文凭,西澳大学医学院,PathWest 医学检验系
“总的来说,Attune Nxt是一款体积小巧但功能强大的流式细胞仪。仪器软件操简单医学。该仪器可用于各种应用;特别适合于仪器供很多用户共享的流式平台。”
Mike Meyer,匹兹堡大学希尔曼癌症中心流式平台主任
“在过去25年的流式研究中我学到了很多。但现在,我非常惊讶地发现,我在用Attune NxT做研究时能够学到更多,而且这种新技术可以发现之前检测不到的东西。
Jordi Petriz,哲学博士,西班牙巴塞罗那Josep Carreras白血病研究所,ESCCA执行委员会顾问,伊比利亚流式协会前任主席
“我们正在寻找一种快速检测抗生素药物对单个细胞影响的方法。传统的药敏实验通常需要1-3天,具体取决于细菌生长、分离以及药敏实验的难易程度。Attune NxT让我们可以在1小时之内对药物是否能有效治疗感染做出判断。在3小时之内,我们可以准确地测出抑制细菌生长所需的最低药物浓度。”
Kieran Mulroney,西澳大学Harry Perkins医学研究所生物医学科学研究员
抗堵塞
许多类型的流式样品都很容易引起仪器堵塞。Attune NxT流式细胞仪的性能如何?
“我们需要一台流式细胞仪,可以快速检测容易引起仪器堵塞的肿瘤样本。因此,Attune NxT是我们此应用领域的首选流式细胞仪。Attune NxT具有许多对我们的研究项目至关重要的特点。它具有声波聚焦的专利技术,使我们能够运行更高通量的样品,同时它的流动室更大,因此当检测肿瘤细胞时不必担心会发生仪器堵塞,也不必花费大量的停机时间让仪器重新启动和运行。”
Charles Prussak,药学博士,哲学博士,加州大学圣地亚哥分校细胞治疗和转化实验室(CTTL)主任
“用过流式细胞仪的老师都知道流式仪器最常见的的问题之一就是发生管路堵塞。使用这款仪器,堵塞将不是问题。你的样本量很大,在每个样品之间没有很多时间将仪器的管路清洗得非常干净。”
Bruno Sainz,西班牙马德里自治大学CLIP研究员
Attune NxT流式细胞仪如何实现高效抗堵塞性能?
Attune NxT流式细胞仪采用注射泵进样系统,与压力系统上的最大“拉力”<15 PSI相比,此系统提供的“推动”样品的压力更大(见图)。
压力系统将样品拉入液流系统
- 压力系统提供的最大拉力<15 PSI
- 易于发生粘度和温度的波动
注射泵进样系统推动样品
- Attune NxT流式细胞仪推动样品的压强高达75 PSI
- 不易发生负压系统引起的堵塞
- 对压力波动耐受
- 更好的系统诊断功能
图1.注射泵进样系统与压力驱动系统的压力PSI测量比较。(左)压力系统将样品拉入系统。压力系统上的最大拉力约<15 PSI。(右) Attune NxT流式细胞仪采用注射泵进样系统,推动样品的压强高达75 PSI。
补偿
与大多数多重检测实验一样,多种染料的组合可能发生光谱重叠现象,为了准确地进行多色实验,则需要调节仪器补偿。补偿调节需要繁琐的操作步骤。
“使用4激光14色的仪器进行免疫表型分析 — 可以尽可能选择溢漏少的荧光通道,从而更容易进行多色实验方案设计。”
J. Paul Robinson博士,普渡大学生物医学工程教授,细胞组学SVM教授
“Attune NxT的多重分析和补偿操作非常简便,且效率极高。Attune NxT是高效、准确检测稀有细胞亚群的理想选择。”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
Attune NxT流式细胞仪如何解决补偿问题?
Attune NxT流式细胞仪旨在降低人为因素和错误操作对补偿调节的影响:
- 硬件 —通过在样品检测区4个空间立体排布的激光器来最大限度地减少颜色补偿,这为多色实验设计提供了灵活性
- 软件— 自动和手动模式,在图预调和后调补偿工具可用于微调补偿;预调补偿和后调补偿工具可有效降低补偿调节的工作量和人为错误,从而保证流式管和微孔板实验数据的可靠性
图 3.应用自动补偿(A-C)和不应用自动补偿(D-F)的实验数据。正确的补偿设置对于准确分析复杂数据并得到可信的结果是至关重要的。应用和不应用自动补偿的结果对比非常明显
学习曲线
“Attune NxT仪器操作简便,软件友好,从仪器安装到运行样品所需的时间很短。”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
“Attune NxT更令人印象深刻的一个特点是“操作简单”。作为流式平台主任,我指导过各种各样的使用者操作不同型号的仪器。教一个流式新手,有时是经验丰富的流式操作人员操作新仪器往往是一个挑战。软件界面友好是关键。我的一些流式用户一旦接触Attune NxT,马上即可上手进行操作。许多人能够在第一次培训时就能进行复杂的多色实验;他们中的一些人在没有平台工作人员协助的情况下独自完成样本检测。真希望我们所有的仪器都这么简单易用!”
Mike Meyer,匹兹堡大学希尔曼癌症中心流式平台主任
“从流式管到微孔板双向切换操作 — 从管到板的即时切换确实是一个不错的优势。”
J. Paul Robinson博士,普渡大学生物医学工程教授,细胞组学SVM教授
时间强度
“流式细胞仪非常适合检测细胞周期不同阶段的细胞比例。大多数情况下,细胞周期按照DNA含量将直方图分解成成G1期、S期和G2 + M期或G1期、S期G2 +早期M和晚期M期。如果将DNA含量与RNA、蛋白或特异性抗原表位结合同时检测的话,工作量会很大 – 通常限于1-4种指标。这些情况下,细胞周期时相的数量会增加。我们最近的工作是,使用6个参数(DNA面积、DNA峰、散射光参数、细胞周期蛋白A2、细胞周期蛋白B1和磷酸化-S10-组蛋白H3),并基于规则系统的定义鉴定出细胞周期X时相。
多年前,细胞周期实验的固定和染色步骤就开始优化,虽然我们已经检测了许多因素,但至今我们还没有发现任何值得注意的改进结果数据分析质量的关键因素。目前,我们正在开发一种“免洗”的染色方法,为了最大限度减少背景染色,利用单个高度稀释样本和声波聚焦技术,让样品在短时间内进行分析检测。结果是引人注目的。S / N值接近完全洗涤的样品;样本处理步骤很少,使得细胞的回归曲线更好,而细胞回归曲线更好使得细胞比例很低的细胞周期时相区分得更清晰。此外,“免洗”方案可显著节省人力成本。我们目前正在用有限细胞数的临床样品测试这种方法,以检测外周血中的S期细胞,将其作为低甲基化治疗的药效学评价的一种方法。
James(Jake)W. Jacobberger,美国俄亥俄州克利夫兰凯斯西储大学哺乳动物细胞生物学和肿瘤细胞生物学教授
“使用FACSCalibur或LSR II时,获取样本时我需要在仪器旁边等待2-3小时,而使用Attune NxT [仪器]将时间可以缩短到40分钟,这大大提高了我的工作效率。”
Li-Rung Huang博士,台湾国立卫生研究院
“经过几个月的使用,我认为Attune NxT是一款性能非常优越的流式细胞仪。令人惊喜的是它可以运行非常稀释的样品,尤其适合稀有样品的检测。”
J. Paul Robinson博士,普渡大学生物医学工程教授,细胞组学SVM教授
“我们的Attune NxT有一个自动进样器,操作也非常简单。我们选择几个指标进行评估,并将NxT与其他96孔板进样器进行了比较。事实证明,Attune NxT自动进样器具有非常好的稳定性和非常低的残留量。我们对自动进样器充分利用了Attune NxT液流系统的优势和高通量样本处理能力印象深刻。自动进样器能够在不影响稳定性或精确度的情况下,运行微孔板的速度比其他品牌进样器更快“
Mike Meyer,匹兹堡大学希尔曼癌症中心流式中心主任
“我们正在寻找一种评估抗生素药物对单个细胞影响的快速检测方法。传统的药敏试验可能需要1 - 3天,具体取决于细菌生长、分离以及药物敏感度试验的难易程度。Attune NxT能让我们在1小时之内判断药物是否能有效治疗感染。在3小时之内,我们可以准确地测出抑制细菌生长所需的最低药物浓度。”
Kieran Mulroney,西澳大学Harry Perkins医学研究所生物医学科学研究员
“我们希望他们可以结合Attune NxT流式细胞仪中的声波聚焦技术 — 从而可以检测这些非常稀有的细胞亚群。它的性能完全符合我们的预期:我们可以用少量的样本、以极快的分析速度,高效、清晰地鉴定出稀有细胞亚群。传统流式细胞仪不能使样本流完全聚焦于流动室的中心,而Attune NxT利用声波聚焦技术,能让样本完全聚焦,而且上样速度极快,所以可以高效地分析稀有细胞亚群。。 ”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
价格
“由于生成的废液很少,因此不仅可以节省仪器成本,也可以节省运行成本。”
Takashi Satoh博士,日本大阪大学IFReC助理教授
“作为流式平台主任,我做过许多不同类型的流式实验:全血分析、裂解无需洗涤、常规细胞制备和稀有细胞检测。Attune NxT功能强大,可以运行所有这些实验,并且与其他多激光、多参数流式细胞仪结果一致… ...尤其适合很多用户共享的流式平台。还有一个优点是性价比高,单个实验室也可以购买使用。”
Mike Meyer,匹兹堡大学希尔曼癌症中心流式平台主任
实验台空间
Attune NxT流式细胞仪可放在流式平台的实验台上(如本页顶部所示),重29 Kg,功率不到200瓦。电线和光路环绕仪器硬件,在保持用户访问、服务访问和制造访问的指导原则的同时进行线路设计。
“该仪器占地面积很小,仪器内装有液流瓶,使得Attune NxT适合任何实验室环境。”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
“在过去的两年里,我的流式平台有一台带有自动进样器的Attune NxT。令人印象深刻的是,这种台式仪器具备更大、更昂贵仪器的所有功能。”
Mike Meyer,匹兹堡大学希尔曼癌症中心流式平台主任
独特性
“流式细胞仪是快速而精密的仪器,可以在单个细胞水平同时分析多达几十种蛋白质。稀有细胞亚群研究越来越重要。它不仅有助于了解疾病发生机制,还有助于发现新的治疗靶点。由于具有多参数检测能力和极高的分析速度,流式细胞术是目前进行稀有细胞分析最有效的研究手段。当我第一次研究HIV阳性患者的iNKT细胞亚群时,样本中iNKT细胞的比例很低(因为HIV阳性的患者免疫功能低下,所以iNKT细胞的阳性率更低)。需要在超过2000万个染色的PBMCs中才能找到这些稀有细胞亚群。之前,没有一款流式细胞仪能够一次分析2000万个细胞。现在,Attune NxT流式细胞仪让我的这一研究项目变得具有可行性。获取完2000万个细胞之后最关键的是如何处理和分析这些数据,只有功能强大的计算机才能解决这个问题。”
Sara De Biasi博士,意大利摩德纳,摩德纳雷焦艾米利亚大学(UNIMORE)生命科学系
“我们实验室的一个主要方向是研究一群新的天然淋巴细胞亚群的鉴定和功能分析。这些细胞亚群在血液和组织样本中都极为稀少。对于流式细胞分析,我们使用的是Attune声波聚焦流式细胞仪。[Attune NxT]的进样速度很快,可以减少离心步骤,从而保留更多样本细胞并且更快地检测稀有细胞。其他款仪器目前都无法实现这样的实验 。”
David Cousins教授,英国莱斯特大学
“我们未来的研究方向是检测外周血中的循环肿瘤细胞,并且开发一种可以结合Attune NxT流式细胞仪免洗免裂解这一特点的新方法。分析血液样品的研究人员都知道,对于全血样本,我们需要先裂解红细胞,然后进行洗涤后才能上机检测,在整个样本处理过程中,您可能会损失掉这些待测的稀有细胞亚群,或者检测效率很低。现在,只需更换一些滤光片,就不必洗涤细胞,也不必裂解红细胞,您可以通过流式细胞仪直接检测标记的细胞 — 通过Attune NxT可以分析稀释的全血样本,并且可以我们以前从未实现过的高速上样分析目的细胞群。因此,我认为这款细胞仪的NWNL方法对于正在进行液体活检分析或检测血液样品中的细胞亚群的研究者来说是非常有帮助的。”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
出版物 — 《免疫研究中使用流式细胞术和细胞分选的操作指南》
《免疫研究中使用流式细胞术和细胞分选的操作指南》,在《欧洲免疫学杂志》上发表的这篇214页的文献,其中有一章由Jordi Petriz和Mike Ward撰写。这期特刊特别报道了免疫研究中使用流式细胞术和细胞分选的操作指南其中包括我们的许多合作,其中有一节介绍了在最小样品处理的情况下,用Attune NXT流式细胞仪免洗免裂解的方法检测活性氧的一种新方法,这一小节由Jordi Petriz和Mike Ward撰写。
标题:《免疫研究中使用流式细胞术和细胞分选的操作指南》
出版物:欧洲免疫学杂志,2017年10月;47(10):1584-1797
DOI:10.1002/Eji.201646632
引用: A. Cossarizza、H. Chang、A. Radbruch、M. Akdis、I. Andrä等人。
“我们想研究关于干细胞活检的相关问题,我们的研究目的是分离和检测循环肿瘤细胞。我们的目标是鉴定和计数患者全血样品中CTC的数量。现在,利用Attune NxT非常适合检测阳性率很低的稀有细胞亚群的技术和能力,我们能够获得患者全血样品中CTC准确计数的可靠数据。我们之前尝试了许多款流式细胞仪,根据多年的经验,我们发现很难准确检测这一细胞亚群。Attune NxT的声波聚焦技术可以检测样品中阳性率很低的稀有细胞亚群,有时我们的血液样品仅有几毫升,因此仪器的样本分析速度以及从可以少量样本中获取可靠的数据是我们一直以来都在关注的仪器性能。”
Bruno Sainz,西班牙马德里,马德里自治大学CLIP研究员
“Attune NxT(仪器)使得在单细胞水平上分析细菌成为可能。结合我们可用的一系列活性染料,它扩展了免培养细菌检测的潜在界限,使其不再依赖于分子生物学的检测方法,尤其是实时定量PCR。
Tim Inglis ,医学士、医学博士、哲学博士、英国皇家病理科医学院院士、澳洲皇家内科医学院荣誉院士、热带医学和卫生学文凭,西澳大学医学院,PathWest 医学检验系
“我们过去五年的研究重点一直是肿瘤干细胞。这些细胞是从患者肿瘤组织中分离的非常稀有的细胞,表现出很强的耐药性。在抗肿瘤治疗中,它们很难被杀死。所以我们研究这些细胞,但随着外泌体技术的出现,我们希望能够搞清楚这些细胞之间如何传递信号以及它们释放的颗粒给器周围的细胞传递何种信息。
我们最近开始研究外泌体。Attune NxT是分析外泌体一个非常好的平台。他们开发了一种新的鞘液超滤方法,可以将背景噪音降低到很低的水平,使得我们可以分析单个小颗粒。我们认为这将是外泌体领域的重大突破。
因此,在评估了多款流式细胞仪之后,我们因其上样速度而选择了Attune NxT。它能够以更高的上样速度分析细胞,具有非常好的精确度,并且它能够处理其他仪器不能解决的问题,尤其是外泌体领域的问题。高分辨率对于帮助我们分析外泌体至关重要,因为与其他类型细胞相比外泌体体积非常小。普通的流式细胞仪无法实现这一点。
在过去的四年中,外泌体领域发展很快。虽然进行健康监测有很多方法,但现在我们可以通过检测外泌体来监测患者的健康状况。这项研究的基础是细胞之间如何传递信号,特别是在肿瘤研究领域。肿瘤细胞通过释放外泌体来影响其周围细胞,从而有助于肿瘤浸润过程的发生。这可能是开发新的肿瘤治疗方法的靶点。因此,扩展了循环肿瘤细胞领域的研究。这些是非常稀有的细胞 — 一管含有数百万甚至数十亿的全血样本中可能只有数千甚至数百个目的细胞。我们通常需要先用磁珠分选或其他富集技术进行细胞预富集。Attune NxT的上样速度极快,并且可以用全血样品直接检测和计数这些稀有细胞,这是Attune NxT的独特优势。
我相信流式细胞术的发展会越来越好。不断出现很多新的技术。我们看到台式仪器的快速发展,例如Attune NxT,它的优势包括分辨率极高、多激光多色,以及独特的超高进样速度。我们对这款仪器的性能非常满意,它是我们平台的主力仪器,可以满足我们绝大部分实验需求。”
Steve McClellan ,理学士、医学检验师、细胞计数专家(美国顾问药师协会),米切尔癌症研究所流式细胞仪和成像中心实验室主任
仅供科研使用,不可用于诊断目的。