我们提供多种用于免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (co-IP) 的试剂盒，可使用不同的方法从感兴趣的靶蛋白中捕获抗体（还能在某些情况下与蛋白质相互作用）。这些方法利用固定化蛋白 A/G 或活化载体（Aminolink 或 Glycolink），直接将抗体固定到基于琼脂糖的微珠上。
- 选择更丰富——提供不同策略，可满足各种抗体和下游分析需求
- 高效——所需抗体 (2–10 μg) 极少，且能够高效捕获抗原
- 完整——co-IP 试剂盒包含阳性对照裂解液，还包括所有裂解、结合、洗涤和洗脱缓冲液
- 快速——包含离心柱和收集管，可缩短实验方案时间并尽量减少样本处理操作
- 灵活——采用可灵活调整的实验方案，方便按需扩大或缩小规模
选择更适合您实验的 IP 或 Co-IP 试剂盒
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|---|---|---|---|---|---|
| Pierce 经典 IP 试剂盒 | Pierce 交联 IP 试剂盒 | Pierce 直接 IP 试剂盒 | Pierce Glycolink IP 试剂盒 | Pierce Co-IP 试剂盒 | |
| 基础微珠 | 蛋白 A/G Plus，6% 琼脂糖 | 蛋白 A/G Plus，6% 琼脂糖 | Aminolink Plus，4% 琼脂糖 | Ultralink（聚丙烯酰胺/ 吖内酯共聚物） | Aminolink Plus，4% 琼脂糖 |
| 抗体与树脂共价结合 | 否 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 抗体正确定向 | 是 | 是 | 否 | 是 | 否 |
| 用抗原洗脱抗体 | 是 | 否 | 否 | 否 | 否 |
| 抗原相对回收率 | 最高 | 中 | 高 | 高 | 高 |
| 相互作用蛋白的共纯化 | 可能 | 可能 | 可能 | 可能 | 最佳 |
| 制备和样本处理时间 | <1 hr | 2–3 hr (min) | 4 hr (min) | < 5 hr (min) | 4 hr（手动操作时间） |
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三种不同的 Thermo Scientific Pierce IP 试剂盒的比较
根据产品说明，使用 10 µg 亲和纯化山羊抗 GFP 抗体和 Pierce 直接、经典和交联 IP 试剂盒执行免疫沉淀。使用 IP 裂解/洗涤缓冲液制备细胞裂解液，并使用试剂盒随附的 Pierce 对照琼脂糖树脂进行预清洗。过夜孵育抗体、树脂和裂解液可形成免疫复合物。使用 IP 裂解/洗涤缓冲液、1X 条件缓冲液洗涤树脂，并用洗脱缓冲液进行洗脱。进行分析时，向 4-20% tris-甘氨酸凝胶中添加 20% 洗脱样本、5% 细胞裂解液上样量 (Lysate) 和 10% 抗体上样量 (IgG)，并使用 Imperial 蛋白染色剂进行染色。对于树脂对照品，进行蛋白沉淀时无需添加抗体。
使用 Thermo Scientific Pierce 交联 IP 试剂盒纯化抗原而无抗体干扰
使用 B-PER 细菌蛋白提取试剂提取出能够表达绿色荧光蛋白 (GFP) 融合的大肠杆菌细胞，然后使用多克隆山羊抗 GFP 抗体进行免疫沉淀。洗脱的 IP 产品使用 SDS-PAGE 分离并使用考马斯染料 GelCode Blue 染色试剂进行染色以检测总蛋白。泳道1显示使用交联 IP 试剂盒获得的单一产物。泳道2显示使用传统 IP 方法获得的多种抗原和抗体片段。MW 是分子量标记物。
使用碳水化合物固定的 IgG 对大靶标进行免疫沉淀
纯化兔多克隆抗 STAT1 或兔多克隆抗 EGFR 经氧化处理并与 20 μL 树脂结合。在室温下将 A549 细胞裂解液 (0.5 mg) 与结合树脂一起孵育1小时。在 4–20% SDS-PAGE 凝胶上分离洗脱的蛋白质，将其转印到硝化纤维素膜上，并使用适当的抗体进行探测。采用 SuperSignal West Dura 化学发光底物与 CCD 成像仪（10秒暴露）进行检测。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。