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Ensayos de cuantificación de ácidos nucleicos y endotoxinas y proteínas sensibles y específicos
Los ensayos Qubit Invitrogen utilizan colorantes selectivos para dianas que emiten fluorescencia únicamente cuando se unen a su ADN, ARN o proteína objetivo. Son más exactos que la absorbancia UV tradicional, que puede sobreestimar las concentraciones de muestra debido a la presencia de contaminantes como sales, disolventes, detergentes, proteínas y nucleótidos libres. Las mediciones de fluorescencia también son mucho más sensibles que la absorbancia UV y los fluorímetros Qubit pueden medir con precisión muestras diluidas con un ruido significativamente menor.
- Ensayos de cuantificación de ADN
- Ensayos de cuantificación de ARN
- Ensayo de calidad e integridad (IQ) del ARN
- Ensayos de cuantificación de proteínas
- Ensayos de detección de endotoxinas
- Ensayos de verificación del sistema
- Ensayos MyQubit personalizados y preconfigurados
- Ion Sphere Quality Control Kit
Sugerencia: Para la cuantificación de alto rendimiento, plantéese la posibilidad de utilizar un lector de microplacas con capacidades de fluorescencia. . Los lectores de microplacas multimodo Thermo Scientific Varioskan ALF y Varioskan LUX son compatibles con los ensayos Quant-iT para cuantificar los mismos analitos que los fluorímetros y ensayos Qubit. Para obtener una comparación, consulte nuestra página de cuantificación de ARN/ADN.
Características
Aunque los ensayos Qubit difieren en los analitos que miden, comparten características que los hacen selectivos, sensibles y fáciles de usar con el fluorímetro Qubit 4 o Flex.
Los colorantes se unen selectivamente al ADN, al ARN o a la proteína
Más sensible que la absorbancia UV y los ensayos tradicionales de proteínas Bradford
Los colorantes emiten fluorescencia solo cuando se unen al objetivo
Minimiza los efectos de los contaminantes, como el ADN o ARN degradados
Fácil de llevar a cabo
Formato sencillo de mezcla y lectura
Tiempos de incubación cortos
Solo 2 minutos para ensayos de ADN y ARN o de 10 a 15 minutos para ensayos de proteínas
Diseñado para fluorímetros Qubit
Optimizado para su uso con los fluorímetros Qubit 4 y Qubit Flex
Comparación de rangos de cuantificación de ensayos
Los ensayos Qubit están disponibles para ADN bicatenario y monocatenario (dsADN y ssADN), ARN, microARN y proteínas. Los ensayos de ADN y ARN Qubit están disponibles con diferentes rangos de cuantificación. Los ensayos HS (alta sensibilidad) cuantifican los niveles más bajos de analito, los ensayos BR (rango amplio) lo hacen en un rango más amplio y el ensayo ARN XR (rango ampliado) es ideal para muestras abundantes. Estos diversos rangos de detección permiten que la medición sea precisa en un amplio rango de concentraciones. Como muestra el gráfico, tanto los ensayos Qubit HS como los BR detectan niveles más bajos de analito con respecto a la absorbancia UV.
Rangos de concentración de muestras para ensayos Qubit y de absorbancia UV
La cuantificación basada en fluorescencia mediante el sistema Qubit es muy sensible; cuantifica muestras de baja abundancia y mide solo la diana prevista, incluso si la muestra contiene ADN y ARN. Las lecturas de absorbancia UV estándar no son lo suficientemente sensibles para detectar niveles bajos de analito y no distinguen entre ARN y ADN, por lo que cuantifican todo el ácido nucleico que se encuentra presente en una muestra.
Además, la cuantificación basada en la fluorescencia mediante el sistema Qubit es capaz de distinguir entre ARN y ADN en la misma muestra, mientras que las lecturas de absorbancia UV normalmente no lo son. Gracias a la solución total que ofrecen las plataformas Qubit, puede confiar en sus resultados porque los ensayos, consumibles e instrumentos se han optimizado de forma conjunta para obtener un rendimiento excepcional.
Ensayos de cuantificación de ADN
Los ensayos Qubit de dsADN están disponibles en dos rangos de cuantificación (HS y BR) y dos formatos (estándar y 1X); ambos son factores importantes que se deben tener en cuenta en las aplicaciones posteriores y el procesamiento. También está disponible un ensayo que cuantifica el ssADN y los oligonucleótidos.
Ensayos de cuantificación de ADN
Producto | Concentración inicial de la muestra | Intervalo de cuantificación | N.º de ensayos | N.º de cat. |
Ensayos de dsADN de alta sensibilidad | ||||
Qubit 1X dsDNA HS Assay Kit | 0,005-120 ng/µL | 0,1-120 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit dsDNA HS Assay Kit | 0,005-120 ng/µL | 0,1-120 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit 1X dsDNA HS Assay Lambda Standard | — | — | 500 | |
Ensayos de dsADN de amplio rango | ||||
Qubit 1X dsDNA BR Assay Kit | 0,2-4000 ng/µL | 4-4000 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit dsDNA BR Assay Kit | 0,2-2000 ng/µL | 4-2000 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit 1X dsDNA BR Assay Lambda Standard | — | — | 500 | |
Ensayo de ssADN | ||||
Qubit ssDNA Assay Kit | 0,01-240 ng/µL | 0,2-240 ng | 100 | |
Ensayos de cuantificación de dsADN
Nuestros ensayos Qubit de alta sensibilidad (HS) y amplio rango (BR) de dsADN tienen un nivel elevado de selectividad para dsADN sobre ARN y ssADN. El ensayo de alta sensibilidad se ha diseñado para muestras con bajas concentraciones de dsADN, lo que ayuda a conservar muestras valiosas. Los ensayos de dsADN HS y BR toleran bien los contaminantes comunes como sales, nucleótidos libres, ARN, disolventes, detergentes o proteínas.
Resultados de ensayos Qubit de dsADN HS
En el fluorímetro Qubit 4 (que se muestra en la imagen) o Qubit Flex, los resultados se pueden mostrar de forma numérica o gráfica. Estas imágenes muestran nuestro ensayo de dsADN de alta sensibilidad (HS) diseñado para muestras con bajas concentraciones de ADN.
En esta prueba, la exactitud y la precisión se evaluaron en los fluorímetros Qubit 4 y Flex, así como en un instrumento de la competencia mediante los ensayos Qubit de dsADN HS y BR. El porcentaje de desviación y CV fueron inferiores para los instrumentos Qubit 4 y Flex que para el de la competencia, lo que demuestra una mayor precisión y exactitud.
Ahorre tiempo y contribuya al cuidado del medioambiente con el formato Qubit 1X Assay
Los ensayos Qubit 1X de dsADN se proporcionan en un formato cómodo mezclado previamente que elimina el paso de preparación de la solución de trabajo Qubit. Simplemente hay que agregar la muestra o el patrón a la solución premezclada, incubar y consultar los resultados. Este formato ofrece un flujo de trabajo simplificado y más rápido a la vez que reduce el número de tubos del kit (y, por tanto, la cantidad de plástico que se utiliza).
El ensayo Qubit 1X de dsADN HS ofrece el mismo intervalo dinámico y límite de detección que el ensayo estándar de dsADN HS, mientras que el ensayo Qubit 1X de dsADN BR tiene un intervalo dinámico más alto que el ensayo estándar de dsADN BR, alcanzando 4000 ng/µL en el rango ampliado.
En esta prueba de los ensayos Qubit 1X dsADN HS (izquierda) y BR (derecha) sobre sus rangos principales, la cantidad medida de dsADN se desvió del valor previsto en menos del 10 %, incluso en presencia de cantidades equivalentes de ARN.
A) Ensayo Qubit 1X dsADN HS
B) Ensayo Qubit 1X dsADN BR
Selectividad de ensayos Qubit 1X dsADN HS (A) y BR (B)
Las gráficas muestran los resultados de cuantificación de las muestras inoculadas con cantidades conocidas de ADN y ARN frente a los valores previstos. Los círculos representan muestras con 10 μL de ADN más 190 μL de solución de trabajo en concentraciones variables. Los cuadrados representan muestras con 10 μL de ARN y 10 μL de ADN más 180 μL de solución de trabajo en concentraciones variables. La cercanía de los círculos y cuadrados, en algunos casos casi indistinguibles, demuestra que estos dos ensayos de dsADN se ven afectados mínimamente por la presencia de ARN.
Ensayo de cuantificación de ssADN
El Qubit ssDNA Assay Kit se ha diseñado para cuantificar el ssADN largo o los oligonucleótidos. Purifique el ssADN antes de llevar a cabo el ensayo, ya que también puede detectar dsADN y ARN. Sin embargo, los resultados del ensayo no se verán afectados por contaminantes comunes como sales, oligonucleótidos cortos (≤ 6 bases), nucleótidos libres, disolventes, detergentes o proteínas.
Hay tres ensayos Qubit de ARN para cuantificar diferentes rangos de concentración de ARN de gran tamaño y un ensayo para cuantificar moléculas de ARN pequeñas (microARN). Para obtener información sobre un ensayo adicional que mida la integridad y la calidad de la muestra de ARN, consulte la siguiente sección sobre el ensayo IQ de ARN.
Ensayos de cuantificación de ARN de gran tamaño
Producto | Concentración inicial de la muestra | Intervalo de cuantificación | N.º de ensayos | N.º de cat. |
Ensayos generales de ARN | ||||
Qubit RNA HS Assay Kit | 0,2-200 ng/µL | 4-200 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit RNA BR Assay Kit | 0,5-1200 ng/µL | 10-1200 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit RNA XR Assay Kit | 5-20 000 ng/µL | 100-20 000 ng | 100 | |
500 | ||||
Ensayo de microARN | ||||
Qubit microRNA Assay Kit | 0,025-150 ng/µL | 0,5-150 ng | 100 | |
500 | ||||
Ensayos de cuantificación de ARN
Ensayos de cuantificación de ARN
Para cuantificar el ARN, es posible elegir entre tres kits de ensayo Qubit de ARN con rangos superpuestos de concentraciones iniciales de muestra, desde 250 pg/μL hasta 10 000 ng/μL. Estos kits cuentan con un alto nivel de selectividad para ARN sobre ADN bicatenario (dsADN). A diferencia de otros ensayos de ARN, no requieren ADNasa para que la medición sea exacta, incluso si hay ADN presente en la muestra. Estos ensayos presentan una buena tolerancia a los contaminantes comunes, tales como sales, nucleótidos libres, disolventes, detergentes o proteínas.
En esta prueba de sensibilidad, tanto los ensayos Qubit de ARN como los de microARN (barras rojas y azules) hacen mediciones muy similares a las concentraciones reales de sus ARN diana (líneas rojas y azules).
Sensibilidad del ensayo Qubit de ARN y microARN
El ARN ribosómico (ARNr) en las concentraciones enumeradas en el eje x se añadió a las muestras que contenían 2 μg/mL de siARN. Las mezclas se analizaron mediante el ensayo Qubit de microARN, el ensayo Qubit de ARN y el ensayo NanoDrop A260, que cuantifica mediante la absorbancia UV. Se promediaron los resultados de ocho réplicas, con las desviaciones estándar que se muestran. El límite de detección del instrumento NanoDrop (barras moradas) para la concentración total de ARN es de 1,5 μg/mL, lo que afecta a su precisión y exactitud a niveles de concentración bajos. El ensayo Qubit de ARN (barras rojas) cuantificó con precisión la concentración de ARNr a gran escala. El ensayo Qubit de microARN (barras azules) cuantificó con precisión la concentración de siARN de 2 μg/mL, mientras que la precisión se vio ligeramente afectada a medida que el ARNr aumentó de 2 a 5 veces esa cantidad. Las líneas de tendencia azules y rojas indican las concentraciones reales de ARNr y siARN en las muestras, respectivamente.
Ensayos de cuantificación de microARN
El Invitrogen Qubit microRNA Assay Kit se ha diseñado para lograr una cuantificación sencilla y precisa de ARN pequeño (de 17 a 25 nt o bp), como el microARN, incluso en presencia de contaminantes comunes como sales, nucleótidos libres, disolventes, detergentes y proteínas. El ensayo cuenta con un nivel elevado de selectividad para ARN pequeño sobre ARNr o ARN mensajero grande (ARNm) (>1000 bp).
El ARN pequeño en muestras puras se ha cuantificado de forma reproducible a niveles tan bajos como 0,5 ng en el tubo de ensayo. El ensayo detecta todos los tipos de ARN pequeño, incluido el microARN y el ARN de interferencia corta (siARN), ambos de cadena simple y doble. Debido a que no detecta nucleótidos, puede distinguir pequeñas partículas de ARNm del ARN completamente degradado.
Ensayo de calidad e integridad (IQ) del ARN
En ensayo Qubit de ARN IQ se ha desarrollado para evaluar con rapidez la integridad y la calidad (IQ) de la muestra de ARN. Emplea dos colorantes: uno que se une a ARN grande, intacto y/o estructurado y otro que se une al ARN pequeño y degradado. Sin necesidad de una manipulación especial, una preparación de muestras laboriosa ni una espera para la obtención de resultados.
Ensayo de calidad de ARN
Ensayos de cuantificación de proteínas
Los kits de ensayo Qubit de proteínas se han diseñados para facilitar y garantizar la precisión de la cuantificación de proteínas. Dado que los rangos de concentración se superponen, ambos kits en conjunto ofrecen precisión en las concentraciones de muestra iniciales desde 12,5 μg/mL a 20 mg/mL y presentan un nivel bajo de variación entre proteínas. Los ensayos de proteínas Qubit son fáciles de llevar a cabo y requieren solo de 10 a 15 minutos de incubación a temperatura ambiente, lo que evita los largos períodos de incubación o la exposición a temperaturas elevadas.
Ensayos de cuantificación de proteínas
Ensayos de detección de endotoxinas
El ensayo de detección de endotoxinas Qubit, diseñado para su uso con el Qubit Flex Fluorometer, ofrece un ensayo terminal fluorescente eficaz para cuantificar las endotoxinas en varios tipos de muestras, como de proteínas, péptidos, anticuerpos o ácidos nucleicos. El ensayo puede realizarse con un volumen de muestra variable y ofrece un rango dinámico de 0,01 a 10,0 EU/mL mediante un flujo de trabajo optimizado. Las características y ventajas clave del Qubit Endotoxin Detection Assay Kit incluyen:
- Alta sensibilidad con un rango amplio: detecta desde tan solo 0,01 EU/mL hasta 10,0 EU/mL.
- Adecuado para una amplia gama de muestras: como de proteínas, preparaciones plasmídicas, ADN y ARN.
- Fácil de usar: al combinarse con el Qubit Flex Fluorometer, los cálculos se realizan automáticamente, lo que ayuda a reducir las posibilidades de error.
Ensayos de detección de endotoxinas
| Producto | Tamaño de la unidad | N.º de cat. |
|---|---|---|
Qubit Endotoxin Detection Assay Kit* | 80 ensayos | Q32891 |
Qubit Flex Pyrogen-Free Tube Strips | Tiras de 120 tubos | Q32893 |
| Qubit Flex Endotoxin Detection Starter Kit | 1 kit | Q32894 |
* Utilice el Qubit Flex System Verification Assay Kit (N.º de cat. Q33254) antes de realizar el primer ensayo en el Qubit Flex.
Ensayos de verificación del sistema
Los kits de verificación del sistema Invitrogen Qubit son ensayos rápidos, fáciles de usar y basados en reactivos que prueban el rendimiento de los fluorímetros Qubit 4 y Qubit Flex. Los tres componentes contienen una solución de reactivo en blanco, un reactivo fluorescente verde y un reactivo fluorescente de color rojo lejano. El reactivo fluorescente verde se ha diseñado para analizar la excitación azul (LED de 470 nm; filtro de excitación de 430-495 nm) y la detección de fluorescencia verde (filtro de emisión de 510-580 nm) en el fluorímetro, mientras que el reactivo fluorescente de color rojo lejano se ha diseñado para analizar la excitación roja (LED de 635 nm; filtro de excitación de 600-645 nm) y la detección de fluorescencia de color rojo lejano (filtro de emisión de 665-720 nm).
Ensayos de verificación del sistema
Producto | Concentración inicial de la muestra | Intervalo de cuantificación | N.º de ensayos | N.º de cat. |
Qubit 4 System Verification Assay Kit | N/A | N/A | 50 | |
Qubit Flex System Verification Assay Kit | N/A | N/A | 25 |
Nota: Cada ensayo de verificación del sistema Qubit solo se puede utilizar con su fluorímetros Qubit especificado y no con el otro.
Ensayos MyQubit personalizados y preconfigurados
Los ensayos MyQubit personalizados le permiten crear ensayos adicionales para su fluorímetro Qubit en minutos. Los reactivos o ensayos que sean compatibles con el hardware Qubit pueden adaptarse para su uso con el Invitrogen Qubit Fluorometer. También hay disponibles varios ensayos MyQubit preconfigurados para su descarga.
Cree nuevos ensayos MyQubit
Los ensayos MyQubit son ensayos de fluorescencia personalizados para su sobremesa, lo que proporciona una plataforma fiable que satisface una gran cantidad de necesidades de cuantificación, desde la investigación de laboratorio y el control de calidad hasta la monitorización de procesos, entre otras muchas. Puede añadir nuevos ensayos a su fluorímetro Qubit 3.0 y 4 mediante una simple descarga y transferencia de archivos .qbt mediante una unidad USB.
My Qubit Assay Design Tool
La MyQubit Assay Design Tool le ayuda a crear archivos .qbt de ensayo MyQubit personalizados que puede cargar en su fluorímetro Qubit 3.0 y 4.
Descargue los ensayos MyQubit preconfigurados
Como ejemplos de los tipos de ensayos personalizados MyQubit que se pueden crear, hemos desarrollado nuevos ensayos MyQubit de varios analitos que se cuantifican con frecuencia mediante reactivos Amplex Red. Al transferir los archivos .qbt del ensayo al fluorímetro Qubit mediante una unidad USB, quedarán disponibles junto con los ensayos Qubit que se han cargado en fábrica, ampliando de este modo las capacidades del fluorímetro Qubit.
Ensayos MyQubit preconfigurados que se encuentran disponibles para su descarga
Ensayo | Descargar para Qubit 3.0 y 4 | Descargar para Qubit 2.0* | Manual en PDF |
Amplex Red Cholesterol Assay | |||
Amplex Red Galactose Assay | |||
Amplex Glucose Assay | |||
Amplex Red Glutamic Acid Assay | |||
Amplex Red Peroxide Assay | |||
Ensayo de sacarosa Amplex Red |
* El Qubit 2.0 Fluorometer requiere una unidad flash USB de 2 GB o menos, como la que se suministra con el instrumento para transferir archivos MyQubit.
Para descargar el archivo .qbt, haga clic en el vínculo del archivo .qbt que le interese de la tabla. Se descargará automáticamente en el ordenador. Asegúrese de hacer clic en el vínculo correcto para su modelo Qubit. Consulte el manual del ensayo en PDF para obtener instrucciones sobre la carga del archivo .qbt en el fluorímetro Qubit.
Ion Sphere Quality Control Kit
En el método Ion Torrent de secuenciación de última generación (NGS), se crean varias copias de cada amplicón en una partícula Ion Sphere (ISP) durante la preparación de plantillas. Antes de secuenciar el ADN o el ARN, es importante conocer la cantidad de ISP positivos de plantilla.
El Ion Sphere Quality Control Kit permite la evaluación rápida y sencilla de los ISP enriquecidos en su fluorímetro Qubit antes de llevar a cabo una NGS en Ion Personal Genome Machine (PGM) o en el Ion GeneStudio System. Los ISP se unen a un oligonucleótido marcado con fluorocromo Invitrogen Alexa Fluor 488 de fluorescencia verde complementario, mientras que solo los gránulos que son positivos a la plantilla se unen a un oligonucleótido marcado con fluorocromo Invitrogen Alexa Fluor 647 de fluorescencia roja complementario.
Ensayo Ion Sphere
Producto | N.º de ensayos | N.º de cat. |
Ion Sphere Quality Control Kit (solo Qubit 4) | 20 |
El fluorímetro Qubit mide la emisión de fluorescencia de cada conjugado de fluorocromo y se utiliza una plantilla de archivo de Excel para calcular el porcentaje de ISP positivos de plantilla a partir de la relación de la señal de fluorocromo Alexa Fluor 647 con la señal de fluorocromo Alexa Fluor 488. Este paso de control de calidad que utiliza un fluorímetro Qubit ayuda a determinar la probabilidad de que se ejecute correctamente la secuenciación, lo que en última instancia ahorra tiempo y gastos durante la secuenciación posterior.
Principio del ensayo Ion Sphere Particle
La secuencia de ácido nucleico B está presente tanto en el cebador ISP como en la plantilla y se utiliza para llevar a cabo la amplificación de la plantilla en la esfera, mientras que la secuencia A únicamente se encuentra presente en la plantilla. Con los fluorocromos Invitrogen Alexa Fluor, la relación de las señales de fluorescencia de los nucleótidos marcados con fluorocromos Alexa Fluor 647 (rojo) y Alexa Fluor 488 (verde) sirve para determinar la cantidad relativa de partículas positivas a la plantilla.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.