在实验室中，已经使用通过 DNA 工程改造的细胞生产重组蛋白，以携带所需多肽的基因。重组蛋白的氨基酸序列与相应天然（野生型）蛋白相同，或其序列经过修饰以改善溶解度或产量等特性。
重组蛋白的用途有哪些？
There are myriad applications for recombinants proteins in biomedical research, as well as diagnostics and therapeutics. Recombinant proteins have become an important tool in various areas of science. Laboratory uses for recombinant proteins include:
- Cell culture supplements, including growth factors for primary cell expansion, differentiation, or stem cell reprogramming
- Generation of organoids and other 3D cell cultures for disease modeling and drug discovery
- Expansion of CAR-T cells by stimulation with recombinant cytokines
- Investigational tools for probing cellular function and cell signaling pathways
- Antigens for immunization and production of antibodies
- Components of functional cell-based assays such as cell migration and angiogenesis
生物活性蛋白
The above applications require that the recombinant protein be biologically active; that is, the protein is recognized by cells and cause changes in those cells. Bioactivity can be measured in an appropriate cell-based assay and quantified as a specific activity or EC50.
Look up international units for PeproTech proteins
Non-bioactive recombinant proteins may be used as standards in protein analysis studies including immunoassays such as western blotting, ELISA, gel shift, and immunohistochemistry.
重组蛋白的类型
有许多具有重要生物学意义的重组蛋白类别都可以从市场上买到，因此无需表达、纯化和验证常用的生物活性重组蛋白。
重组蛋白的主要类型包括：
重组蛋白等级
当为特定应用选择重组蛋白时，了解需要哪种等级的质量控制和文件是有帮助的。
仅供研究使用 (RUO)
研究级重组蛋白适用于多种生命科学研究应用，包括细胞模型开发、维持细胞表型和体外分析。
无动物源性
无动物源性重组蛋白的设计和制造可降低由动物源性病原体（如病毒和 BSE）引起的污染风险，生产时不使用任何动物源性试剂、纯化的培养基等。
无动物成分
作为防止动物病原体污染的额外保障，无动物成分重组蛋白在严格控制的生产条件下于专用的无动物成分实验室中生产。
GMP 级
GMP-manufactured recombinant proteins undergo extensive testing and are accompanied by documentation to support projects/applications that require this level of rigor.
关于重组蛋白的常见问题
生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下，生物测定是基于细胞的检测，会使用不同的指示细胞，例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以 ED50 表达，它代表诱导 50% 最大反应的细胞因子浓度。
The specific activity of a biologically active protein can be determined using the following equation:
1 x 106 / ED50 (ng/mL) = specific activity (units/mg)
The ED50 (a.k.a EC50) can be found on the CoA for the recombinant protein, but we advise determining the ED50 of a given recombinant protein in your functional assay system.
For additional information on ED50 and its relationship with specific activity, please refer to our Tech Tip.
首先，对容器进行离心，使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或 CoA 将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。
通常，我们建议将冻干重组蛋白储存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时，我们建议您制备至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份试液，并在 –20°C 至 –80°C 下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明，请见产品手册、数据表或检验证书 (CoA)。
重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在冻干过程中，蛋白成品可能为薄薄的，有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上，而非颗粒状。沉淀物的大小（如果有）与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。
为确保蛋白产物的完全回收，在打开冻干重组蛋白瓶之前，建议对其进行离心 20–30 秒，以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后，您可以通过在 SDS-PAGE 上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说，只要在丙烯酰胺凝胶上上样 10 ng 的蛋白，应该就能看到预期大小的蛋白条带。
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