マルチプレックスIHCのためのAluora空間増幅（Spatial Amplification）

Aluora Spatial Amplification Kitは、高輝度のAluora色素と、酵素を介したシグナル増幅を組み合わせることで、マルチプレックスIHCおよび空間イメージング用の非常に明るい共有結合フルオロフォアを生成します。Aluora Spatial Amplification Kitは蛍光シグナル強度を向上させて、1つの組織サンプルで最大8つのターゲットの可視化を容易にします。この技術は空間生物学研究に非常に有用で、空間的関係性や細胞相互作用の検出と理解を可能にします。

Aluora空間増幅を使用する際の基本ステップは、一次抗体標識、ポリ西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）二次抗体反応、Aluora色素反応によるフルオロフォアの沈着、そして抗体複合体を除去してフルオロフォアが組織サンプルに共有結合的に標識されたままにすることです。

図1.Aluoraシグナル増幅標識のワークフロー。組織を目的のターゲット用の一次抗体で標識した後、ポリ西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）二次抗体でインキュベートします。その後、Aluora色素反応でフルオロフォアが組織上に共有結合します。その後、抗体複合体を除去し、プロトコルを繰り返すことで、マルチプレックスイメージングを行うことができます。

Invitrogen Aluora色素は輝度が高く、感度も向上しているため、空間プロテオミクス用途に最適です。類似した輝度と、異なる蛍光スペクトルを持つ8種類のフルオロフォアを使用して、スペクトルイメージングシステムで最大8プレックスマルチプレックス解析が可能で、包括的な空間イメージングを実現できます。また、これらのフルオロフォアは、酵素媒介シグナル増幅により少量のターゲットを非常に良好に検出でき、必要な一次抗体量は大幅に少なくて済みます。シグナル増幅の合間で循環的に抗体をストリップしたり、Leica BONDなどの自動スライド染色装置を用いて、同種の一次抗体をこれらの試薬とともに使用できます。そのため、マルチプレックス染色ワークフローを効率化できます。

• 輝度の向上—空間プロテオミクスアプリケーションに最適化された、より明るい蛍光体で蛍光感度が向上し、他のシグナル増幅システムよりも優れた、1:1,000～1:50,000の一次抗体希釈を可能にします。
• 低発現ターゲットの検出の向上—HRP酵素を介したAluoraシグナル増幅を採用しているため、バックグラウンドノイズよりも低発現量のターゲットを優位に検出できます
• 機器とのシームレスな互換性—EVOS S1000 Spatial Imaging SystemおよびAkoya PhenoImagerでの蛍光スペクトルイメージング用に特別に設計されており、空間イメージングシステムとシームレスに統合できます
• マルチプレックス用の抗体オプションの拡張—フルオロフォアの共有結合を介した酵素媒介標識は、シグナル増幅のラウンド間で一次抗体のストリッピングを可能にし、同じ宿主種由来の一次抗体の使用を可能にするため、マルチプレックス標識実験の抗体オプションを拡張します

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Aluora空間増幅試薬には、空間イメージング用に特別に設計された8種類の蛍光色素のセットが含まれます。これらの色素は最大8プレックスのマルチプレックスを可能にし、Akoya PhenoImagerなどのシステムでマルチプレックス空間イメージングするためにスペクトルを分離できる蛍光スペクトルを有しています。これによりパネル設計やアッセイ開発を簡素化します。さらに、Aluora色素は、標準的なフィルターセットを備えた、いかなるイメージングシステムでも使用できますが、ハイプレックスパネルではスペクトルのオーバーラップを慎重に考慮する必要があります。

Aluora試薬のOrder Information

同じ宿主種の複数の一次抗体を使用してmIHCを実行できることは、マルチプレックス標識の新たな可能性を開きます。Aluora空間増幅試薬は低発現量ターゲットの感度を向上させるだけでなく、1つの組織サンプルで同一または異なる宿主種からの一次抗体のマルチプレックス検出を可能にし、抗体の交差反応のリスクはありません。Aluora空間増幅技術は、IHCサンプル中の抗体染色に共有結合および局在化する高反応性のチラミド様ラジカルを生成します。一次および二次抗体は、Aluora色素シグナルの発現が完了した後に抗体のストリッピングを使用して組織から除去でき、沈着したフルオロフォアの強度は低減しません。抗体を除去した後、同一または異なる宿主種の一次抗体（ウサギまたはマウスで作成）で、交差反応のリスクなく組織を再プローブし、その後、Aluora空間増幅を再度実行して検出できます。利便性とスループットを向上させるために、これらのステップはLeica Bond RXシステムなどの自動スライド染色装置で実行できます。

組織染色用のマルチプレックスシグナル増幅

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