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Die Handbücher, Broschüren, Anwendungshinweise, technische Hinweise, Videos, Webinare und anderen Ressourcen in diesem Abschnitt werden Ihnen helfen, das Beste aus Ihrem Thermo Scientific NanoDrop One/OneC, Eight oder Lite Plus Spektralphotometer oder 3300 Fluoreszenzspektrometer herauszuholen.
Ähnliche Materialien für NanoDrop 2000/2000c, 8000, Lite und 1000 Spektralphotometer finden Sie unter Ressourcen für nicht mehr erhältliche NanoDrop Geräte unten auf dieser Seite.
Das vielleicht auffälligste Merkmal der NanoDrop Quantifizierung ist die einfache und unkomplizierte Anwendung. Das bahnbrechende NanoDrop Sockelsystem hilft bei der Minimierung des Probenvolumens und vereinfacht die Anwendung. Pipettieren Sie einfach einen Tropfen Ihrer DNA-, RNA- oder Proteinprobe auf den Sockel, 1 bis 2 µl reichen aus, und ziehen Sie den Arm nach unten. Küvetten oder Kapillaren werden nicht benötigt, und die Ergebnisse werden in Sekundenschnelle angezeigt.
NanoDrop Spektralphotometer arbeiten basierend auf dem Prinzip der Absorption vom ultravioletten bis sichtbaren Bereich des Spektrums (UV/VIS-Absorption). Nukleinsäuren absorbieren Licht mit einem Peak bei 260 nm. Aufgereinigte Proteine absorbieren Licht mit einem Peak bei 280 nm, während Peptide und Proteine, die keine Tryptophan- und Tyrosinreste aufweisen, mit einem Peak bei 205 nm absorbieren. Viele Kontaminanten, die nach der Durchführung von Extraktionsprotokollen übrig bleiben, absorbieren bei 280 nm oder 230 nm.
Erzeugung eines optischen Signals
Die photometrische Messung von Nukleinsäuren (DNA und RNA) und Proteinen basiert auf ihren spezifischen Absorptionseigenschaften. Bei der Messung eines Absorptionsspektrums absorbieren Nukleinsäuren Licht mit einem charakteristischen Peak bei 260 nm.
Die Konzentrationen von Nukleinsäuren und Proteinen werden automatisch anhand ihrer gemessenen Absorptionswerte bei der gewünschten Wellenlänge mit dem Lambert-Beerschen Gesetz berechnet, wobei:
Eine Implikation des Lambert-Beerschen Gesetz ist, dass bei Proben mit niedriger Konzentration eine größere Schichtdicke zu höherer Genauigkeit und einem höheren Signal-Rausch-Verhältnis führt. NanoDrop Geräte optimieren automatisch die Länge der Flüssigkeitssäule für maximale Genauigkeit über einen breiten Konzentrationsbereich.
Die Genauigkeit der NanoDrop One dsDNA-Quantifizierung wurde anhand eines Referenzgeräts validiert. Es wurde eine Reihe von dsDNA-Verdünnungen im Bereich von 3 bis 28.000 ng/µl vorbereitet. Anschließend erfolgte spektralphotometrisch die Quantifizierung bei 260 nm mit den NanoDrop One und Evolution 300 Spektralphotometern. (A) Zum Vergleich der Linearität wurden die Ergebnisse über den gesamten Konzentrationsbereich der Geräte graphisch dargestellt. Die Regressionslinie zeigt, dass die NanoDrop One dsDNA-Konzentrationsergebnisse gut mit den Werten übereinstimmen (R2 = 0,9991), die mit dem Thermo Scientific Evolution 300 Spektralphotometer als Referenzgerät ermittelt wurden. (B) Zum genaueren Vergleich der Linearität im unteren Konzentrationsbereich der Geräte (von 3 bis 495 ng/μl) wurden die Ergebnisse ebenfalls graphisch aufgetragen. Die Regressionslinie belegt eine enge Korrelation (R2 = 1) mit den Evolution 300 Ergebnissen und eine hervorragende Linearität am unteren Ende des Nachweisbereichs. Weitere Informationen zur Methode und die ausführlichen Daten finden Sie im technischen Hinweis zu NanoDrop One Nukleinsäuremessungen.
Die Reinheit einer Probe kann anhand des Absorptionsverhältnisses einer Wellenlänge zur anderen beurteilt werden. Eine Probenkontamination kann zu einer Überschätzung der Nukleinsäurekonzentration und/oder zu Ungenauigkeiten in nachfolgenden Prozessen oder Messungen führen.
Wichtigste UV-Absorptionsverhältnisse für die Reinheitsbestimmung
Verhältnis | Analyt | Als „rein“ betrachtet | Faktoren, die zu anormalen Verhältnissen führen können |
A260/A280 | Nukleinsäuren | DNA: ~1,8 | Kontaminanten, auf die niedrige Quotienten hindeuten: · Proteine · Reste von Phenol oder anderen im Extraktionsprotokoll verwendeten Reagenzien |
A260/A230 | Nukleinsäuren | DNA/RNA: ~2,0 bis 2,2 | Kontaminanten, auf die niedrige Quotienten hindeuten: · Proteine · Kohlenhydratverschleppungen (oft ein Problem bei Pflanzen) · Phenolreste aus der Nukleinsäureextraktion · Guanidinreste (wird häufig in säulenbasierten Kits verwendet) · Für die Ausfällung verwendetes Glykogen Faktoren, auf die hohe Quotienten hindeuten: · Probleme mit der Blindwertbestimmung |
A260/A280 | Proteine | ~0,6 | Kontaminanten, auf die hohe Quotienten hindeuten: · Nukleinsäuren |
Über die Absorptionsverhältnisse hinaus können Verunreinigungen die spektralen Profile verändern, indem sie Spitzen (Peaks) und Täler (Throughs) verschieben, wie in der Abbildung dargestellt.
Kontaminanten verursachen Verschiebungen in spektralen Profilen
Spektren aufgereinigter DNA ohne Kontamination (A, rot) und derselben Probe, die mit Guanidin (B, grün) und Phenol (C, braun) kontaminiert ist.
NanoDrop Geräte, auf denen die Acclaro Sample Intelligence Software läuft wird, können diese Art von Gesamtspektrumdaten verwenden, um Kontaminanten zu identifizieren, wie unter Merkmale beschrieben.
Technische Unterstützung in den USA und Kanada erhalten Sie telefonisch unter 877-724-7690, Option 4, oder per E-Mail an den NanoDrop technischen Support unter nanodrop@thermofisher.com. Wenn Sie internationale Unterstützung benötigen, senden Sie eine E-Mail an nanodrop@thermofisher.com oder wenden Sie sich an Ihren lokalen NanoDrop Händler.
Viele Fragen zum technischen Support lassen sich mit Hilfe der oben aufgeführten Dokumentation, Literatur, Videos und Webinare beantworten. Darüber hinaus umfassen unsere kostenlosen Online-Schulungsmaterialien diese Lerncenter und Seiten zu den Themen Spektroskopie, Proteinbiologie und Nukleinsäurequantifizierung.
Hier finden Sie Handbücher, Broschüren, Anwendungshinweise, technische Hinweise, Videos und andere Ressourcen, mit denen Sie Ihr NanoDrop 2000/2000c, 8000, Lite oder 1000 Spektralphotometer optimal nutzen können.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.