从多种易于使用且可靠的封闭缓冲液和试剂中进行选择，用于 ELISA 应用。ELISA 缓冲液和试剂是开发最佳检测性能以实现高灵敏度、低背景和封闭非特异性结合的重要组成部分。寻找以下封闭缓冲液、包被缓冲液、洗涤缓冲液和推荐的裂解缓冲液，以在 ELISA 应用中取得成功。
关于全套 ELISA试剂，请参阅 Invitrogen ELISA 缓冲试剂盒（货号：CNB0011，包括：2瓶包被缓冲液（pH 7.4和pH 9.4）、检测缓冲液（封闭缓冲液）、洗涤缓冲液、稳定的TMB和终止液。将其与匹配抗体对试剂盒（包含匹配抗体对试剂盒配对、标准品和链霉亲和素-HRP）配对使用。
推荐的 ELISA 封闭缓冲液
ELISA 封闭缓冲液是一种非相关蛋白质、蛋白质混合物或其他化合物的溶液，被动吸附到平板上所有未被包被蛋白质占据的剩余结合表面。如果通过减少背景信号并提高信噪比可改善检测灵敏度，则封闭缓冲液有效。理想的封闭缓冲液将结合到发生非特异性相互作用的所有可能位点，完全消除背景，而未改变或掩盖抗原决定簇进行抗体结合。选择易于使用且可靠的封闭缓冲液，用于以下 ELISA 应用。
| 封闭缓冲液 | 封闭剂 | 产品优势 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|---|
| ELISA 稀释液 | BSA |
|
| 浓缩物（DS98200） |
| SuperBlock 封闭缓冲液 | 不含血清和生物素的单一纯化糖蛋白 |
|
| PBS (37515) TBS (37535) PBST (37516) TBST (37536) |
| Pierce 无蛋白封闭缓冲液 | 封闭缓冲液的成分不含蛋白 |
|
| PBS (37572) TBS (37570) PBST (37573) TBST (37571) |
推荐的 ELISA 板包被缓冲液、洗涤缓冲液和终止液
| 缓冲液 | 组成 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|
| ELISA 板包被缓冲液 | 10mM 磷酸缓冲液，pH 7.4 | 推荐大多数蛋白质使用 | 浓缩物（CB07100） |
| 50mM 碳酸缓冲液，pH 9.4 | 高 pH 值有助于部分蛋白质和肽的溶解，并确保大多数蛋白质未质子化并带有整体负电荷，这有助于与带正电荷的板结合。 | 浓缩物（CB01100） 粉末（28382） | |
| ELISA 洗涤缓冲液 | 含 0.05% Tween 20 的 Tris 缓冲盐水 | 浓缩物 (28360) 粉末（28379） | |
| 含 0.05% Tween 20 的磷酸盐缓冲盐水 | 浓缩物 (28352) 粉末（00-0400-46） | ||
| ELISA 稀释剂 | 含 BSA 的磷酸盐缓冲溶液 | ELISA 稀释剂旨在用作 （1）ELISA 板封闭剂，（2） ELISA 标准品和样品稀释剂，（3）检测抗体稀释剂，和（4）HRP 结合物稀释剂 | 浓缩物（00-4202-56） |
| 终止液 | 0.16 M 硫酸 | 使用辣根过氧化物酶和 TMB 底物溶液时用作终止液 | 即用型（N600） |
推荐的细胞裂解缓冲液
| 缓冲液 | 组成 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|
| NP40 细胞裂解缓冲液 | 50 mM Tris、pH 7.4、250 mM NaCl、5 mM EDTA、50 mM NaF、1 mM Na3VO4、1% NP40、0.02% NaN3 | 最受欢迎且推荐用于细胞膜和细胞质蛋白的裂解，以使用ELISA 测量细胞内蛋白 | 即用型（FNN0021） |
| RIPA 细胞裂解缓冲液 | 10 mM Tris、pH 7.4、100 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1 mM NaF、20 mM Na4P2O7、2mM Na3VO4、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 脱氧胆酸盐 | 需要比 NP40 更严苛的缓冲，或者还需要核分裂 | 即用型（FNN0011） |
| 组织提取试剂 I | 50 mM Tris、pH 7.4、250 mM NaCl、5 mM EDTA、2 mM Na3VO4、1 mM NaF、20 mM Na4P2O7、0.02% NaN3 和洗涤剂 | 如果 NP40 或RIPA 不足，则用于从组织样品中提取总蛋白或用于总蛋白溶解的替代制剂 | 即用型（FNN0071） |
AP 和 HRP 结合物
从多种缀合物和检测探针中选择，用于直接或间接 ELISA 应用。以下是推荐的生物素结合探针，包括链霉亲和素和 NeutrAvidin 蛋白。每个蛋白每分子可以结合 4 个生物素，具有高亲和力和选择性。链霉亲和素是最常用的——因为是非糖基化亲和素，非特异性结合水平极低。中性亲和素经过处理去除了亲和素的糖基，等电点降低，使非特异性结合也降低了。
对于直接偶联的一级和二级抗体，检索抗体酶结合物
ELISA 应用推荐的 HRP 结合物和 AP 结合物
| 共轭物 | 酶 | 建议浓度* | 益处，适用时间 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|---|
| HRP-链霉亲和素 | HRP | 0.1 µg/mL | 最受欢迎 | 2 mg（21124） 1 mg（21126） 5 mg（21127） |
| Poly-HRP 链霉亲和素 | HPR | 1:2,000 - 1:20,000 | 在典型 HRP 结合物显示微弱信号时使用。Poly 增加信号放大并改善典型（非 Poly）链霉亲和素-HRP 结合物提供的信号 | 0.25 mL（N200） |
| HRP-NeutrAvidin | HRP | 0.1 µg/mL | 抗生物素蛋白的特殊制备形式，可降低生物素结合的背景 | 2 mg（31001） |
| HRP-NeutrAvidin，高灵敏度 | HRP | 1:8,000 - 1:40,000 | 无背景低水平靶点检测；像聚 HRP 结合物一样提供信号放大 | 0.5 mL （31030） |
| AP-链霉亲和素 | AP | 0.1 µg/mL | 1 mg（21324） | |
| AP-NeutrAvidin | AP | 抗生物素蛋白的特殊制备形式，可降低生物素结合的背景 | 2 mg（31002） |
*各种具体应用的最佳稀释度必须根据经验确定。稀释液须现用现配。
推荐的 ELISA 封闭缓冲液
ELISA 封闭缓冲液是一种非相关蛋白质、蛋白质混合物或其他化合物的溶液，被动吸附到平板上所有未被包被蛋白质占据的剩余结合表面。如果通过减少背景信号并提高信噪比可改善检测灵敏度，则封闭缓冲液有效。理想的封闭缓冲液将结合到发生非特异性相互作用的所有可能位点，完全消除背景，而未改变或掩盖抗原决定簇进行抗体结合。选择易于使用且可靠的封闭缓冲液，用于以下 ELISA 应用。
| 封闭缓冲液 | 封闭剂 | 产品优势 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|---|
| ELISA 稀释液 | BSA |
|
| 浓缩物（DS98200） |
| SuperBlock 封闭缓冲液 | 不含血清和生物素的单一纯化糖蛋白 |
|
| PBS (37515) TBS (37535) PBST (37516) TBST (37536) |
| Pierce 无蛋白封闭缓冲液 | 封闭缓冲液的成分不含蛋白 |
|
| PBS (37572) TBS (37570) PBST (37573) TBST (37571) |
推荐的 ELISA 板包被缓冲液、洗涤缓冲液和终止液
| 缓冲液 | 组成 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|
| ELISA 板包被缓冲液 | 10mM 磷酸缓冲液，pH 7.4 | 推荐大多数蛋白质使用 | 浓缩物（CB07100） |
| 50mM 碳酸缓冲液，pH 9.4 | 高 pH 值有助于部分蛋白质和肽的溶解，并确保大多数蛋白质未质子化并带有整体负电荷，这有助于与带正电荷的板结合。 | 浓缩物（CB01100） 粉末（28382） | |
| ELISA 洗涤缓冲液 | 含 0.05% Tween 20 的 Tris 缓冲盐水 | 浓缩物 (28360) 粉末（28379） | |
| 含 0.05% Tween 20 的磷酸盐缓冲盐水 | 浓缩物 (28352) 粉末（00-0400-46） | ||
| ELISA 稀释剂 | 含 BSA 的磷酸盐缓冲溶液 | ELISA 稀释剂旨在用作 （1）ELISA 板封闭剂，（2） ELISA 标准品和样品稀释剂，（3）检测抗体稀释剂，和（4）HRP 结合物稀释剂 | 浓缩物（00-4202-56） |
| 终止液 | 0.16 M 硫酸 | 使用辣根过氧化物酶和 TMB 底物溶液时用作终止液 | 即用型（N600） |
推荐的细胞裂解缓冲液
| 缓冲液 | 组成 | 何时使用 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|
| NP40 细胞裂解缓冲液 | 50 mM Tris、pH 7.4、250 mM NaCl、5 mM EDTA、50 mM NaF、1 mM Na3VO4、1% NP40、0.02% NaN3 | 最受欢迎且推荐用于细胞膜和细胞质蛋白的裂解，以使用ELISA 测量细胞内蛋白 | 即用型（FNN0021） |
| RIPA 细胞裂解缓冲液 | 10 mM Tris、pH 7.4、100 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1 mM NaF、20 mM Na4P2O7、2mM Na3VO4、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 脱氧胆酸盐 | 需要比 NP40 更严苛的缓冲，或者还需要核分裂 | 即用型（FNN0011） |
| 组织提取试剂 I | 50 mM Tris、pH 7.4、250 mM NaCl、5 mM EDTA、2 mM Na3VO4、1 mM NaF、20 mM Na4P2O7、0.02% NaN3 和洗涤剂 | 如果 NP40 或RIPA 不足，则用于从组织样品中提取总蛋白或用于总蛋白溶解的替代制剂 | 即用型（FNN0071） |
AP 和 HRP 结合物
从多种缀合物和检测探针中选择，用于直接或间接 ELISA 应用。以下是推荐的生物素结合探针，包括链霉亲和素和 NeutrAvidin 蛋白。每个蛋白每分子可以结合 4 个生物素，具有高亲和力和选择性。链霉亲和素是最常用的——因为是非糖基化亲和素，非特异性结合水平极低。中性亲和素经过处理去除了亲和素的糖基，等电点降低，使非特异性结合也降低了。
对于直接偶联的一级和二级抗体，检索抗体酶结合物
ELISA 应用推荐的 HRP 结合物和 AP 结合物
| 共轭物 | 酶 | 建议浓度* | 益处，适用时间 | 可用规格（货号） |
|---|---|---|---|---|
| HRP-链霉亲和素 | HRP | 0.1 µg/mL | 最受欢迎 | 2 mg（21124） 1 mg（21126） 5 mg（21127） |
| Poly-HRP 链霉亲和素 | HPR | 1:2,000 - 1:20,000 | 在典型 HRP 结合物显示微弱信号时使用。Poly 增加信号放大并改善典型（非 Poly）链霉亲和素-HRP 结合物提供的信号 | 0.25 mL（N200） |
| HRP-NeutrAvidin | HRP | 0.1 µg/mL | 抗生物素蛋白的特殊制备形式，可降低生物素结合的背景 | 2 mg（31001） |
| HRP-NeutrAvidin，高灵敏度 | HRP | 1:8,000 - 1:40,000 | 无背景低水平靶点检测；像聚 HRP 结合物一样提供信号放大 | 0.5 mL （31030） |
| AP-链霉亲和素 | AP | 0.1 µg/mL | 1 mg（21324） | |
| AP-NeutrAvidin | AP | 抗生物素蛋白的特殊制备形式，可降低生物素结合的背景 | 2 mg（31002） |
*各种具体应用的最佳稀释度必须根据经验确定。稀释液须现用现配。
相关产品和资源
夹心 ELISA 方案
比色和化学发光 ELISA 详细方案。
ELISA试剂盒及抗体对
利用高度验证的 Invitrogen ELISA 试剂盒对单个分析物进行可靠定量分析。
ELISA 仪器和设备
洗板机、酶标仪、移液器。
